孙乔慧，朱友明，何家才

口腔鳞状细胞癌(oral squamous cell carcinoma, OSCC)是世界第八大恶性肿瘤，约占口腔颌面部恶性肿瘤的80%。主要治疗方式是手术、放疗和化疗。尽管医疗水平在不断提高，但因局部浸润、易转移、易复发的特点，寻找新的靶点，对改善患者的预后状况具有重要的临床意义。ATP 柠檬酸裂解酶(ATP citrate lyase，ACLY)是脂肪酸代谢的关键酶，将柠檬酸以及辅酶A转化为乙酰辅酶A及草酸乙酸，因此ACLY位于脂肪酸代谢通路的最上游。在许多肿瘤如肺癌、前列腺癌、膀胱癌、乳腺癌以及结肠癌中，ACLY呈病理性高表达或酶活性增强。因此ACLY靶点抑制肿瘤成为一个潜在的研究热点。

microRNA是一类高度保守的长约19～25个nt的内源性非编码单链小RNA。经过初步研究发现miR-27a/b-3P是调控ACLY的潜在miRNA。该研究旨在探索ACLY与miR-27-3P家族的关系，观察其对SCC-3细胞增殖的影响，从而为OSCC的临床早期治疗提供理论基础，并为其靶向治疗拓宽思路。

1 材料与方法

1.1 细胞株与主要试剂

人舌鳞癌细胞株SCC-3、大肠杆菌菌株DH5α由安徽省口腔疾病研究重点实验室提供；PsiCHECK-2双荧光素酶报告基因空载体、Plko.1质粒载体由中国科技大学细胞生物学吴缅实验室提供；Scramble RNA、miR-27a-3P mimic、miR-27b-3P mimic、miR-27a-3P inhibitor、miR-27b-3P inhibitor购自上海吉玛制药技术有限公司；shACLY(GCCTCAAGATACTATACATTT)、shmiR-27a-3P(G-AGATGCTTTGCTACTACTTA)、shmiR-27b-3P(GCTCACTTCATGTGGCAGCTT)、PCR引物由上海生工生物工程技术服务有限公司合成；DMEM培养液、青链霉素溶液、胎牛血清、PBS、胰酶购自Gibco公司和Hyclone公司；1%氯化钠、1%蛋白胨、0.5%酵母提取物购自上海生工生物工程技术股份有限公司；快速定点突变试剂盒购自北京天根生化科技有限公司；ACLY抗体、actin抗体购自美国Santa Cruz公司;RNA提取试剂盒购自美国 Promega公司；……