陈 方，李 恒，游 慧，邱煜焱，王 宁，陈 微

0引言

增殖性玻璃体视网膜病变(proliferative vitreoretinopathy，PVR)是一种致盲性疾病，是导致孔源性视网膜脱离手术修复失败的主要原因。一旦形成，PVR就很难治疗。因此，开发预防PVR的方法非常重要。血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor，VEGF)基因是一种人体内自然生成的细胞因子，目前已有研究表明抗VEGF治疗可以减轻玻璃体的生物活性预防临床PVR的形成[1]。

目前越来越多的研究表明人视网膜色素上皮(retinal pigment epithelium，RPE)细胞的增殖和上皮-间质转化参与增殖膜的形成在PVR的发生和发展过程中起重要作用[2-3]。miRNA是新发现通过调控转录后基因表达来影响机体功能的一类小分子非编码RNA，已有证据表明，许多miRNA分子通过RPE增殖、迁移以及凋亡参与PVR的形成，如miRNA-146a和miR-194等[4-5]。miRNA-147是研究报道较多的一种小RNA，在类风湿性关节炎、恶性肿瘤等疾病发生发展中发挥了重要作用[6-7]。但miRNA-147与PVR相关性尚未见报道。本研究前期生物信息学筛查发现，VEGF可能是miRNA-147的靶基因。miRNA-147与VEGF在PVR发生发展过程中是否具有调控作用，有待于进一步探究。因此，以ARPE-19细胞为研究对象，初步探讨了miRNA-147靶向调控VEGF对ARPE-19细胞的生物学行为的影响。

1材料和方法

1.1材料主要试剂：ARPE-19细胞系购于上海佰晔生物科技中心。DAB显色试剂盒、MTT试剂盒、Lipofectamine2000转染试剂、Trizol购自北京索莱宝科技有限公司。双荧光素酶报告基因检测试剂盒购于美国Promega公司。野生型和突变型的VEGF 3’-UTR双荧光报告质粒购自苏州吉玛基因股份有限公司。DMEM、胎牛血清购于美国Gibco公司。miRNA-147模拟物(ATCGTCTTCGTAAAGGCGTGTG)及其对照(AGTTCTTGCACGGAACGTACG)、VEGF抑制剂(GTCATGAAGTTCATGGATG)以及对照(GTGTGGATGAAAGTATGTC)、VEGF过表达(上游：5’-AAGCTTATGAACTTTCTGCTGTCTTGGGTGC-3’；……