张瑞丽，钱云，杨静逸

（云南舜喜再生医学工程有限公司，云南昆明 650106）

脱氧核糖核酸（Deoxyribonucleic Acid，DNA）是构成染色体的重要组成部分[1]。基因组DNA中含有生物体所有的遗传信息，随着生物技术的发展以及深入的研究，各种基因工程技术已在医药、农业、畜牧等领域中得到广泛的应用[2-3]。

DNA测序技术在医学遗传学的研究中是必要的手段之一。本实验将DNA置于silica膜中保存不同的时间，通过对比保存不同时间的DNA结构完整性，得出DNA在加水立柱中可保存时间，为DNA长途运输极限时间提供数据支持。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 实验样本

抗凝全血样使用EDTA二钠抗凝管采集，并置于4 ℃备用。

1.1.2 仪器及试剂

无核酸污染的Tip头、无水乙醇，生工生物工程（上海）股份有限公司；1 kb DNA Ladder（Dye Plus）和6×Loading Buffer，宝日医生物技术（北京）有限公司；UltrapowerTM核酸染料，北京百泰克生物技术有限公司。

MICROCL 17/17R 高速离心机，美国Thermo Scientific公司；VORTEX-GENIE®2漩涡混合器，美国Scientific Industries公司；单道可调精准移液器，美国RAININ®；AxyPrep血基因组DNA试剂盒，江苏康宁；NanoDrop 2000超微量分光光度计，美国Thermo Scientific公司；G：BOX F3凝胶成像系统，美国Syngene公司。

1.2 实验方法

1.2.1 人全血DNA提取方法

采用AxyPrep血基因组DNA试剂盒对采集的血液样本进行DNA提取，在silica膜中央加入100 μL的ddH2O洗脱DNA。

1.2.2 DNA浓度及完整性测定

取1 μL的DNA样本用超微量分光光度计测定其浓度和纯度（A260/A280）；取 1 μL的 DNA、0.21 μL的6×Loading Buffer、1 μL的1%核酸染料混合液点样于琼脂糖凝胶进行电泳（1%琼脂糖凝胶，电压120 V，时间40 min），用凝胶成像系统采集图像，检测基因组完整性。

1.2.3 试验设计

分为加封口膜（F）和无封口膜（NF）两组，每组样品分别在24 ℃、相对湿度为54%环境下保存0 d、6 d、10 d、14 d、18 d、20 d、22 d 及 24 d时测定其浓度、完整性及剩余体积，每组设置3个重复，以第0 d作为对照组。……