夏泽亮，刘言玉，褚 亮，刘言浩，王法宝，周超毅，蒋 磊

胆囊癌是一种发生在胆囊组织的恶性肿瘤，其发病率在我国消化道肿瘤高居第五[1]。胆囊癌早期临床症状不明显，诊断困难，且由于其恶性程度高、病情发展迅速、预后差等特点，使胆囊癌病人的死亡率较高，五年生存率不足5%[2-3]。近年黏蛋白(mucin，MUC)对于肿瘤的影响逐渐得到学术界的重视[4]。MUC是一种通过上皮细胞分泌，具有单次跨膜结构的高度糖基化蛋白，在信号转导通路、免疫应答等生理病理过程中均具有一定调控作用[5]。MUC16基因位于染色体19p13.2位点，是卵巢癌的特异性诊断标志物之一。但当前关于胆囊癌细胞与MUC16间相互作用的研究仍不深入。本文采用RNA干扰技术观察MUC16对人胆囊癌细胞GBC-SD增殖和迁移的影响，探讨其可能的作用机制，以期为后续研究提供参考。现作报道。

1 材料与方法

1.1 材料与仪器 人胆囊癌GBC-SD细胞(中科院上海分院细胞所细胞库)；胎牛血清、DMEM培养基(美国GIBICO公司)；pGMLV-SC1 RNAi慢病毒载体(上海前尘生物公司)；PCR试剂primer(生工生物工程上海有限公司)；Matrigel胶(美国BD公司)；96孔板和CCK-8(美国Corning公司)；奥林巴斯IX71/81型倒置显微镜(日本奥林巴斯公司)。

1.2 方法

1.2.1 分组与处理 采用慢病毒感染GBC-SD细胞中MUC16(GBC-SD+MUC16-siRNA组)，同时设立阴性对照组(GBC-SD+NC组)及空白对照组(GBC-SD组)。采用RT-PCR、Western blotting法鉴定siRNA MUC16基因沉默效果，采用Western blotting法检测GBC-SD细胞中增殖细胞核抗原(PCNA)和CD44蛋白表达情况。

1.2.2 RT-PCR 引物由上海生物工程科技有限公司合成，根据基因库，设计并合成3个siRNA质粒沉默胆囊癌细胞GBC-SD。插入序列如下：MUC16siRNA1：AAA GCC ACA TCA CCA ATG TTT；MUC16siRNA2：ACA GCA GCA TCA AGA GTT ATT；MUC16siRNA3：AAA CCT CAC CAT CTG TAA CTT；对照序列为GGA ATC TCA TTC GAT GCA TAC。抽提总RNA，逆……