曹志伟

（莱西市农业农村局 266600）

犬瘟热(canine distemper,CD)是一种传染性极强的烈性传染病,由犬瘟热病毒(canine distemper virus,CDV)感染引起，能使多种动物自然感染和发病，包括食肉目犬科、貂科和浣熊科，但不传染人类和猫。感染犬瘟热后，病畜以呈现双相热型、皮屑、严重的消化道障碍和呼吸道炎症等为特征，有特殊的腥臭味，偶有神经症状，发病死亡率较高[1]。

早在18世纪的后叶欧洲即有犬瘟热病毒病的存在，Carre氏于1905年发现病原为病毒。我国水貂犬瘟热首发于1968年，近年来，犬瘟热病毒不断侵染各种动物，特别是给毛皮动物养殖业带来了巨大经济损失，故称此病为毛皮动物三大疫病之一。

1 材料与方法

1.1 材料

山东省某水貂场送检的疑似犬瘟热的病死水貂2只（未接种犬瘟热疫苗），无菌采集病貂肝脏和肺脏作为病毒分离材料，分别放入已标好序号的无菌病料采集袋中，置-20℃保存。

1.2 方法

本试验采用RT-PCR扩增方法诊断犬瘟热病毒，即反转录聚合酶链式反应(reverse transcription-polymerase chain reaction)。

1.2.1 试验处理

在GenBank中，根据已报道的CDV毒株核蛋白基因(N)序列，选择基因保守序列作为PCR扩增的靶序列，用Prinler 5.0软件分别设计1对扩增287bp的N基因引物，42℃水浴60min，反转录合成为cDNA。

1.2.2 PCR反应

将cDNA置于PCR反应体系中，用振荡器振荡混匀，将28μL体系分装入200μL的离心管，加反转录产物（模板）2.0μL，吹打，摇晃至无气泡进行反应。经过94℃预变性5min，94℃变性30s，55℃退火40s，72℃延伸90s，反应30个循环，72℃终延伸10min等程序，靶序列被放大上万倍甚至上百万倍从而被检测出来[2]。

2 结果与分析

本试验通过凝胶电泳技术对是否有核酸片段扩增进行判断，用扩增产物的基因片段大小与目的基因片段大小进行比对，若一致，即可判定病料中含有犬瘟热病毒。……