陈梦言 白洁 柯文灿 许冬梅 艾琳 郭旭生

（1. 兰州大学生命科学学院，兰州 730000；2. 兰州大学益生菌与生物饲料研究中心，兰州 730000；3. 兰州大学草地农业科技学院，兰州730000；4. 中国畜牧业协会，北京 100044）

青贮饲料是指以青绿饲草为原料，在厌氧条件下通过乳酸菌发酵而调制的优质青粗饲料。青贮的成功与否与原料特性、发酵环境及原料附生微生物等因素密切相关。大量研究已经证明发酵代谢产物、降雨量、温度、湿度、经纬度和海拔都会影响青贮饲料微生物菌群的结构组成［1-3］。因此，目前已采用多种生物学方法对微生物群落组成结构及微生物在青贮饲料发酵过程中行使的生物化学过程进行了探究，如从早期的平板培养技术到以聚合酶链式反应技术为基础延展出的变性梯度凝胶电泳、末端限制性片段长度多态性、长度异质性PCR和自动核糖体基因间隔分析等技术［4-7］，再到变性梯度凝胶电泳（DDGE）和16S rRNA基因的末端限制性片段分析技术（T-RFLP）方法等。虽然这些方法已获得大量并富有成效的研究成果，但其获得微生物种类的信息量较少，无法准确反映微生物的菌种类型和数量的弊端仍需进一步解决。因此，如何利用分子生物学手段全面准确检测和定量青贮饲料中的微生物群落结构和种类特征将对突破青贮饲料发酵的微生态调控研究具有重大意义，也是目前青贮饲料发酵微生物调控亟待解决的问题。对此，人们尝试使用高通量测序手段进行解决。随着高通量测序技术的发展，二代测序技术和基于SMRT测序技术的16SrRNA基因全长测序的出现为解决该问题提供了切实可行的方法。……