梁广霞，覃喜团，谢维，谢有科

0 引言

肺癌是我国发病率和病死率均位居前列的恶性肿瘤[1]。非小细胞肺癌（NSCLC）是最常见的肺癌亚型，占肺癌病例的85%[2]。肿瘤干细胞（cancer stem cells,CSCs）是恶性肿瘤复发或转移的主要原因，具有自我更新、无限增殖和形成异质性肿瘤细胞的肿瘤细胞亚群。CSCs对几乎所有常规肿瘤药物具有抗药性或不敏感，能在多数现有肿瘤治疗手段中存活下来并引起肿瘤复发和转移。CSCs通过活化多种不同信号通路，如

Wnt/β-catenin、Sonic Hedgehog、Notch、PI3K/Akt/mTOR、STAT3等，获得强大的存活能力。醛脱氢酶1（ALDH1）、致癌微RNA及上皮-间质转化（EMT）[3]也参与了CSCs的干性维持和存活调控。以CSCs为靶点的药物研究为肿瘤临床治疗提供新的治疗思路[4]。

莱菔硫烷（sulforaphane,SFN）是从绿花椰菜或其幼芽中提取的一种经葡糖异硫氰酸盐转化的天然化合物，其预防和抗肿瘤的效果在乳腺癌、膀胱癌、结肠癌、肺癌等多种恶性肿瘤中得到证实[5-8]。本课题组前期研究表明，SFN不仅能有效抑制肺癌细胞的增殖能力，还能在较低药物浓度下特异地抑制肺癌干细胞的增殖；SFN处理后伴随着细胞内大量miRNAs改变[8-9]，推测SFN可能通过调控肺癌干细胞miRNAs转录水平而介导肺癌干细胞的活性，但SFN与miRNAs的相互作用关系至今仍不清楚。本研究旨在探索SFN在抑制肺癌干细胞的干性和EMT特征过程中miRNA的调控机制。

1 材料与方法

1.1 试剂

莱菔硫烷购于美国Sigma公司；鼠抗人β-catenin、Klf4、c-myc和E-cadherin等单克隆抗体购自美国Santa Cruz公司。莱菔硫烷用DMSO溶解分装并贮存在-20℃冰箱中待用。miR-200c拮抗物（iRNA-200c）由上海凯基生物科技公司合成，PCR引物由美……