张彦春，杨 波，王 苗，冀国强，马红梅，李 颖，张茂俊

小肠结肠炎耶尔森菌(Yersiniaenterocolitica)可导致耶尔森菌病[1-2]，广泛分布于自然界，是少数几种能在冷藏温度下生长的肠道致病菌之一，该菌天然寄居在多种动物体内，通过污染食物(牛奶、猪肉等)和水经粪-口途径感染或因接触染疫动物而感染[3-5]。Y.enterocolitica的毒力基因主要有5种，其中包括染色体源毒力基因ail、ystA、ystB和质粒源毒力基因yadA、virF，与人腹泻密切相关[6]。Y.enterocolitica嗜冷，因此欧洲高纬度国家耶尔森菌病流行强度较高[3-5]。北京虽处于温带地区，但冬季时间长且气温低，极有可能具备Y.enterocolitica流行的先决条件。

因体外培养Y.enterocolitica菌落小且菌落特征不典型，造成实验室分离培养Y.enterocolitica难度增加，通常需要经验丰富技术人员的仔细甄别，容易造成菌落遗漏和错误识别。本研究对70份零售生猪肉样品进行Y.enterocolitica检测，为提高分离培养阳性率，本研究在传统增菌分离培养方法的基础上增加了对增菌液进行Y.enterocolitica特异基因荧光PCR预筛查检测，旨在准确获得本地区零售生猪肉中Y.enterocolitica分布及病原特征。

1 材料与方法

1.1 材 料

1.1.1 样品来源 采集来自北京顺义区超市和小型市场零售摊位的生猪肉样品，采样时间2019年3月至2020年10月，共计70件。样品采集后4 ℃暂存，2 h内送入顺义区疾病预防控制中心实验室检测。

1.1.2 主要仪器与试剂 耶尔森选择培养基为美国OXOID公司产品；改良磷酸盐缓冲液(PSB)、胰酪大豆琼脂(TSA)、改良克氏双糖铁(KIA)为北京陆桥公司产品；脉冲场凝胶电泳试验使用的Tris-Hcl、EDTA、SDS、TBE、蛋白酶K为索莱宝公司产品；NotI、XbaI内切酶为美国NEB公司产品；……