膜联蛋白A7低表达对人胃癌MGC-803细胞迁移和侵袭的影响
2021-11-02柏友兰刘明伟王小杰
柏友兰,刘明伟,王小杰,李 欣
(承德医学院基础医学院,河北承德 067000)
胃癌被认为是目前全球范围内最常见的恶性肿瘤之一,特别是在中国和其他亚洲国家,死亡率均居于恶性肿瘤平均死亡率的第2位[1]。其早期症状缺少特异性,多数病例在确诊过程中已被认定为中晚期,且致死率高,5年内生存能力差,严重威胁了人类的生命健康。所以,了解它们的发病机理、寻找合适的诊断和预后指示标志物意义重大。膜联蛋白(annexin)是钙离子依赖的磷脂结合蛋白,与细胞转化、癌症进展和肿瘤转移有关[2]。膜联蛋白A7(annexin A7,ANXA7)又称synexin,属于A组Annexin家族。研究发现在大多数胃肠道癌症中,ANXA7异常表达,是一种特异性的促癌候选基因[3]。然而,其对胃癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响目前尚不清楚。因此,本研究通过在胃癌MGC-803细胞中敲低ANXA7,观察其可否引起细胞迁移和侵袭的改变,从而探讨膜联蛋白A7在胃癌转移过程中的临床意义。
1 材料和方法
1.1 试剂和仪器设备
细胞1640培养液及胎牛血清FBS(Gibco公司,美国);靶向ANXA7及阴性siRNA(吉玛基因,苏州);lipo2000转染试剂(Invitrogen公司,美国);GAPDH、ANXA7、E-cadherin和MMP-9兔抗人单克隆一抗(Epitomics公司,美国) ;山羊抗兔二抗(KPL公司,美国);Transwell小室(康宁公司,美国);二喹啉甲酸(bicinchoninicacid,BCA)蛋白定量试剂盒(索莱宝生物科技,北京) ;CO2培养箱(HER Aceu150,贺利公司,德国);MK3酶联蛋白检测仪(Thermo公司,美国);ECL发光仪(Tanon6100,上海天能公司)。
1.2 细胞培养及转染
于上海赛百慷生物公司购入人胃癌细胞系MGC-803,使用的1640细胞培养液含10% FBS,置于5% CO2的细胞培养箱中37℃恒温培养。将细胞接种于6孔板中,次日用于转染,约(3~5)×104个/孔,分为si-ANXA7组、阴性对照组(si-con)和空白对照组(blank);……
