马文 杜娟 向凝 杨卉 黄逢敏 冯芳 胡全

(贵州医科大学附属医院 1干部诊疗科，贵州 贵阳 550004；2呼吸与危重症科)

血管重塑是慢性阻塞性肺疾病(COPD)的特征性病理改变，而肺动脉平滑肌细胞(PASMCs)是血管重塑的主要效应细胞〔1〕。研究发现，PASMCs在各种理化因素刺激下，可合成分泌多种细胞因子，如单核细胞趋化蛋白(MCP)-1、转化生长因子(TGF)-β1等，在炎症反应、气道重塑等病理过程中发挥重要作用〔2,3〕。在哺乳动物中，Toll样受体(TLR)4参与炎症反应过程，但其信号通路与MCP-1、TGF-β1是否存在相关性尚未阐明〔4～6〕。本研究旨在分析COPD大鼠PASMCs中MCP-1、TGF-β1蛋白的表达情况及与TLR4的相关性，有利于进一步探究COPD的病理机制。

1 材料和方法

1.1实验动物及分组 选取北京大学医学院实验动物中心提供的雄性成年Wistar大鼠36只(合格证号：SCXKG 2015-0020)，SPF级，体重250～300 g，自然光照下常规饲养，室温保持在23℃左右。根据随机数字表法将其分为脂多糖(LPS)组、TLR4抑制剂组、LPS+TLR4抑制剂组和对照组各9只。实验大鼠均健康，LPS组平均体重(232.8±7.7)g，TLR4抑制剂组平均体重(233.6±7.8)g，LPS+TLR4抑制剂组平均体重(233.1±7.6)g，对照组平均体重(232.0±7.5)g，差异无统计学意义(P>0.05)。

1.2实验仪器及试剂 自制有机玻璃舱(92 cm×63 cm×43 cm)；NIB400显微镜(深圳市星明光学仪器有限公司)；蛋白质电泳及转膜仪(上海艾研生物科技有限公司)；Berthold LB 942微孔板式多功能酶标仪(上海艾研生物科技有限公司)；硬包中华牌香烟(上海烟草公司出品)；胎牛血清、LPS、DMEM培养基、TLR4鼠单克隆抗体、β-actin小鼠单克隆抗体、辣根过氧化物酶标记的羊抗鼠二抗、酶联免疫吸附试验(ELISA)试剂盒、二氨基联苯胺(DAB)显色试剂盒及总蛋白提取试剂盒(上海抚生实业有限公司)；T……