杨传广 席作武 王凯 韩晓丽

(河南中医药大学 1第二临床医学院，河南 郑州 450000；2第二附属医院肛肠科)

结肠癌是一种常见的消化道恶性肿瘤，我国结肠癌的发病率和死亡率呈逐年上升趋势。半边莲(LCL)是临床上常用的抗癌中药，用于治疗肝癌 、肺癌 、胃癌、直肠癌、食道癌、宫颈癌等多种癌症，其可抑制肿瘤细胞增殖、诱导细胞凋亡〔1，2〕。研究发现LCL提取物对胃癌、肝癌细胞增殖有一定的抑制作用，并且其可诱导肝癌细胞凋亡〔3〕，但目前LCL对结直肠癌的影响研究较少。研究发现miR-20a在直肠癌、肠炎相关结直肠癌中表达上调〔4〕。miR-20a-3p靶向含有4个mbt区域的scm相关基因(SFMBT1)影响角质形成细胞的增殖和凋亡〔5〕。脆性组氨酸三联体(FHIT)在结直肠癌中下调表达，其可能参与结直肠癌细胞凋亡的调节，并有研究证明过表达FHIT可抑制结直肠癌细胞增殖、侵袭活性〔6〕。本研究旨在探究LCL通过miR-20a-3p/FHIT对结直肠癌细胞增殖、凋亡、迁移、侵袭的影响。

1 材料与方法

1.1材料 结直肠癌细胞SW480(上海生命科学院细胞库)；LCL(福建省中医药研究院)；胎牛血清(法国 Biowest公司)；DMEM培养基、青-链霉素双抗(美国Gibco公司)；miRNA 荧光定量试剂盒；RIPA裂解液、二喹啉甲酸(BCA)蛋白检测试剂盒(美国Thermo scientificals公司)、Tranwell 小室(美国Millipore公司)；基质胶(美国BD公司)；LipofectamineTM2000转染试剂(美国invitrogen公司)；miR-con、miR-con mimic、anti-miR-NC、anti-miR-20a-3p、si-NC、si-FHIT的构建(上海吉凯基因公司)；双荧光素酶报告基因检测试剂盒(北京，天根生化科技有限公司)；Annexin V-FITC凋亡检测试剂盒(美国 Sigma公司)；细胞周期蛋白(Cyclin)D1、B淋巴细胞瘤(Bcl)-2、P21、Bcl-2相关X蛋白(Bax)一抗(美国Abcam公司)；上皮型钙粘蛋白(E-cadherin)、基质金属蛋白酶(MMP)-2、β-肌动蛋白(actin)抗体(美国CST公司)；……