李秀萍，王 玲，王 馨，祁兴春，董 力

紫草素是从紫草根中提取的主要生物活性成分。有研究表明，紫草素具有治疗癌症、炎症和伤口愈合相关的多种功能[1]，但紫草素的药理作用机制有待探究。Rho激酶(Rho kinsase， ROCK)包括ROCKⅠ和ROCKⅡ两种类型[2-3]。ROCKⅠ参与癌症、炎症损伤等多种疾病的致病过程[4]，该基因是否受紫草素的调控尚不清楚。本研究通过构建结核分枝杆菌诱导THP-1细胞炎性损伤模型，观察紫草素对细胞炎性因子分泌的影响，并分析其与ROCKⅠ/NF-κB信号通路之间的关系，为紫草素的临床应用提供理论依据。

1 材料与方法

1.1材料 紫草素由中国食品药品检定研究院提供；结核分枝杆菌由中国疫病控制中心结核病实验室提供； THP-1购自中国上海科学研究院细胞库；细胞计数试剂盒(CCK-8)购自北京康为世纪；荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)试剂盒购自北京索莱宝公司；兔抗ROCKⅠ抗体、辣根过氧化物酶标记的二抗购自上海艾博抗公司。

1.2方法

1.2.1THP-1细胞的培养：培养液为15%胎牛血清的RPMI 1640培养基，混有1%双抗(青链霉素)；培养条件：37 ℃，5% CO2，饱和湿度的恒温细胞培养箱；隔天传代1次。

1.2.2细胞处理与分组：将培养48 h的THP-1细胞标记为空白组；将空白组细胞用结核分枝杆菌(病毒载量10)处理24 h作为模型组；将紫草素用DMSO稀释成0.50、2.50、12.50、62.50 μg/ml，取等剂量药物与模型组细胞混合培养48 h，分别标记为0.50、2.50、12.50、62.50 μg/ml组，筛选最适浓度标记为实验组；用等剂量的DMSO与模型组细胞混合培养48 h标记为对照组；si-NC、si-ROCKⅠ、pcDNA、pcDNA-ROCKⅠ分别转染模型组细胞，标记为si-NC组、si-ROCKⅠ组、pcDNA组、pcDNA-ROCKⅠ组；将pcDNA、pcDNA-ROCKⅠ转染实验组细胞，标记为实验+pcDNA组、实验+pcDNA-ROCKⅠ组。

1.2.3CCK-8实验：取待检测的空白组、模型组、对照组、紫草素组(0.50、2.50、12.50、62.50 μg/ml)，用培养液调至每毫升1×105个细胞。……