左 斌，夏晓枫，车 彪，何精选，唐家国

腰椎间盘突出是由多种因素产生的复杂脊柱疾病[1]，主要原因为椎间盘退变。腰椎间盘组织再生能力有限，而髓核细胞(NPCs)是腰椎间盘组织的唯一构成细胞，NPCs退变可直接使椎间盘组织中细胞数量减少[2]。椎间盘退变的机制涉及NPCs凋亡和炎症反应的产生，褪黑素不仅能促进NPCs的增殖[3]，还能抵抗氧化应激诱导的NPCs凋亡[4]。沉默信息调节因子(SIRT)可以降低氧化应激水平和炎症程度[5]，还可通过叉头框转录因子O1(FOXO1)途径调节氧化应激诱导的大鼠NPCs衰退[6]。但是褪黑素调控SIRT1/FOXO1通路对椎间盘NPCs退变的影响，目前报道较少。本研究通过使用过氧化氢处理椎间盘NPCs以诱导氧化性损伤，模拟体外NPCs退变，并干扰SIRT1后使用褪黑素处理，旨在从SIRT1/FOXO1通路探讨褪黑素对椎间盘NPCs退变的影响。

1 材料与方法

1.1材料

1.1.1人椎间盘髓核组织：本研究所用髓核组织源于长江航运总医院骨外科腰椎间盘突出症患者12例，年龄45～67岁，平均52岁，保守治疗无效。所有患者均已自愿签订知情同意书，本研究获得医院伦理委员会审批，伦理批准编号：L20200058。

1.1.2主要试剂和仪器：褪黑素(原料药，纯度99%，西安金绿生物工程技术有限公司,批号：73-35-2)；细胞计数试剂盒-8(CCK-8)购自北京智杰方远科技有限公司,批号：VN10053；siRNA NC(RNA干扰阴性对照)和siRNA SIRT1(RNA干扰SIRT1表达载体)均由上海生工生物科技有限公司合成(批号：K10059、K10061)；RNA抽提试剂盒(批号：P1063)、逆转录试剂盒(批号：PD5017)、荧光定量PCR试剂盒(批号：SF4113L)、Annexin V-FITC细胞凋亡检测试剂盒(批号：C1065S)均购自上海碧云天生物科技有限公司；肿瘤坏死因子-α(TNF-α，批号：m1034517)、白细胞介素-1β(IL-1β，批号：m1062451)、酶联免疫吸附试验(ELISA)试剂盒购自上海酶联生物科技有限公司；……