赵立娜，翟 臻，梁 晨，李以良，李 巍，祝东升

雌激素受体(ER)阳性乳腺癌是最常见的乳腺癌亚型之一[1]，其主要治疗方法为内分泌治疗，但长期治疗可能会导致多种不良反应及内分泌抵抗，从而降低了有效性[2]。因此，针对ER阳性乳腺癌的治疗方法仍旧面临重重困难，迫切需要开发新的治疗策略。

粉防己碱(tetrandrine，TET)是从粉防己(StephaniatetrandraS.Moore)根部提取的一种双苄基异喹啉生物碱[3]。多项研究已经证明TET通过诱导细胞凋亡从而发挥抗肿瘤活性[3-4]。内质网是细胞质内参与细胞稳态、凋亡和蛋白质折叠等多种生理过程的细胞器[5]，内质网应激则是细胞自噬和(或)凋亡的重要途径[6]。基于上述理论研究，诱导内质网应激从而促进肿瘤细胞凋亡在抗癌治疗中的临床价值得到了越来越多的关注；但TET是否促进ER阳性乳腺癌细胞凋亡、是否通过内质网应激发挥促凋亡作用尚不清楚。本研究以BT474细胞为实验模型，揭示内质网应激对TET诱导ER阳性乳腺癌细胞自噬与凋亡的作用。

1 材料与方法

1.1细胞系 ER阳性乳腺癌细胞系BT474购自美国模式培养物研究所(ATCC)。

1.2主要试剂及仪器 TET(Sigma)、RPMI 1640(Gibco)、胎牛血清(FBA，Gibco)、胰酶(Gibco)、MTT(Sigma)、BCA蛋白定量试剂盒(Thermo)、Annexin V和PI凋亡试剂盒(索莱宝)。兔源抗LC3-Ⅱ单克隆抗体、兔源抗Beclin1单克隆抗体、兔源抗GRP78抗体、兔源抗p-PERK抗体、兔源抗p-eIF2α抗体、兔源抗CHOP抗体、兔源抗ATF6抗体、兔源抗β-actin抗体(Cell Signaling Technology，CST)、HRP标记羊抗兔IgG二抗(Santa Cruz Biotechnology)。酶标仪(Bio-Rad)、流式细胞仪(BD)、蛋白电泳系统(Bio-Rad)、凝胶成像系统(Bio-Rad)、细胞培养箱(Thermo)。

1.3细胞培养 乳腺癌细胞系BT474使用RPMI 1640 培养液+10% FBS，于37 ℃，5% CO2培养箱中培养。

1.4MTT检测 对数期BT474细胞经0.25%胰酶消化后，接种于96孔板中，每孔细胞数3×103个。……