黄英 蒋龙

液相色谱-串联质谱法测定鸡肉中尼卡巴嗪残留标志物的不确定度评定

黄 英，蒋 龙

（深圳信测标准技术服务有限公司，广东深圳 518000）

摘 要：依据标准GB 29690—2013和JJF 1059.1—2012对液相色谱-串联质谱法（LC-MS/MS）测定鸡肉中尼卡巴嗪残留标志物过程中的各个不确定度来源进行分析，计算相对扩展不确定度。

关键词：LC-MS/MS;鸡肉;尼卡巴嗪残留标志物;不确定度

尼卡巴嗪是一种广谱的抗球虫剂，常用于防治鸡等禽类球虫病。4，4-二硝基均二苯脲（下文均用DNC表示）是尼卡巴嗪成分之一，是起抗虫效果的主要活性成分，通常将其作为尼卡巴嗪的残留标志物。本文通过对测量DNC残留量的过程进行分析，识别不确定度来源，列出影响测定结果的不确定度因素，计算相对扩展不确定度[1-2]。

1 测量方法和数学模型

1.1 测量方法

①材料。DNC标准物质、乙腈、甲醇。②步骤。取均质后鸡肉样品m（2 g），加乙腈提取，取上层液浓缩，定容至V（1.0 mL），滤膜过滤。③设备。液相色谱质谱联用仪（AB）、万分之一天平。④色谱条件。色谱柱C18，流速

0.3 mL/min。

1.2 数学模型

样品与标准溶液同时测定，以峰面积比值为纵坐标，浓度为横坐标绘制标准曲线，从标准曲线上求得样品溶液的浓度，按公式计算待测样中DNC的含量，计算公式：

（1）

式中：X-待测样中DNC的含量，μg/kg;C-由标准曲线所得的DNC浓度，ng/mL;V-样品最终定容体积，mL;

m-取样量，g。

X是由C、V、m计算得到的，因此X的不确定度分别由C、V、m的不确定度合成，采用相对标准不确定度分析。

2 测量总相对标准不确定度的来源

由标准曲线所得DNC浓度的相对标准不确定度urel（C），样品称量产生的相对标准不确定度urel（m），

样品定容产生的相对标准不确定度urel（V），重复性测量产生的相对标准不确定度urel（重复），因此urel（总）=

。各相对不确定度分量及其影响因素[4]见图1。

3 测量不确定度的计算

3.1 标准曲线所得的DNC浓度的相对标准不确定度urel（C）

3.1.1 标准溶液产生的相对不确定度urel（标准）

（1）配制标准工作液产生的相对不确定度。DNC标准溶液：100 μg/mL，不确定度为5%，k=2。配制标准工作液：

1.00 μg/mL、0.10 μg/mL、0.01 μg/mL。①使用10 mL容量瓶（A级），允差为0.02 mL，使用3次。②使用20～200 μL

移液器，允差为0.002 mL，使用2次。③使用100～1 000 μL

移液器，允差为0.01 mL，使用1次。④DNC标准溶液产生的不确定度为。按矩形分布，以上4项合成配制标准工作液的相对不确定度为：

0.030 8（2）

（2）配制曲线使用容量瓶产生的相对不确定度。使用

5 mL容量瓶（A级），允差为0.02 mL，使用6次，按矩形分布计算相对不确定度为：（3）

（3）配制曲线使用移液器时产生的相对不确定度。使用100～1 000 μL移液器，允差为0.005 mL、0.010 mL。0.250 mL、

0.500 mL和1.000 mL各移取2次，按矩形分布计算相对不确定度为：

（4）

合并（2）（3）（4）得标准溶液的相对不确定度为：

。

3.1.2 标准曲线所得DNC浓度的相对标准不确定度urel（C）

标准曲线为6个浓度点，每个浓度测定3次，共n=18个。由实验数据进行线性拟合得线性方程y=0.414 32 x-0.116 07，相关系数0.998 5。对样品测量7次，由峰面积比值通过直线方程求得其浓度，结果见表1。

依据式[3]：

（5）

式中：u（c样液）代表标准曲线求得C样液产生的不确定度;SA/C代表标准曲线求得的A标和相应的Ai的回归剩余标准差;m代表样品溶液的测定次数，m=7;n代表标准溶液测定的次数，n=18;b代表回归系数;C样液代表样品处理液中DNC的浓度，ng/mL;C代表样品处理液中DNC浓度的回归值，ng/mL;代表标准溶液中DNC浓度平均值，ng/mL;Ci代表各标准溶液中DNC浓度，ng/mL;Ai代表标准溶液各点峰面积的测定值;A标代表标准溶液各点峰面积的回归值。

计算：SA/C为0.335，u（c样液）为0.360 ng/mL，得urel（回归）=

u（c样液）/C样液==0.039 4，综上得：

urel（C）==0.054 1。

3.2 重复性测量产生的相对不确定度urel（重复）

依据表1，计算标准偏差为0.267，计算相对不确定度为==0.016 8。

3.3 样品称量产生的相对不确定度urel（m）

使用万分之一天平，允差为0.5 mg，按矩形分布计算相对不确定度为

3.4 样品定容产生的相对不确定度urel（V）

使用100～1 000 μL移液器，允差为0.01 mL，按矩形分布计算相对不确定度为urel（V）=

3.5 合成总相对标准不确定度

，

u=0.056 9 ×4.57=0.260 mg/kg

当包含因子k=2，则扩展不确定度为0.260×2≈

0.52 μg/kg。

4 结论

当DNC含量为4.57 mg/kg时，其相对扩展不确定度为0.52 μg/kg（k=2））。LC-MS/MS测定鸡肉中尼卡巴嗪残留标志物时，不确定度主要由标准物质、移液器、容量瓶的误差、线性回归引入;样品称量、样品提取过程所引入的不确定度很小，可以忽略。可通过选择较高纯度的标准物质、增加标准曲线重复测定和多次测量平行样降低结果的不确定度[5]。

参考文献

[1]农业部 卫生和计划生育委员会.食品安全国家标准 动物性食品中尼卡巴嗪殘留标志物残留量的测定 液相色谱-串联质谱法：GB 29690—2013[S].北京：中国标准出版社，2021.

[2]中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局.测量不确定度评定与表示：JJF 1059.1—2012[S].北京：中国标准出版社，2012.

[3]中国合格评定国家认可委员会.CNAS-GL006：2019化学分析中不确定度的评估指南[EB/OL].（2019-04-09）[2021-07-20].https：//www.cnas.org.cn/rkgf/sysrk/rkzn/2019/04/896487.shtml.

[4]宋迎春，袁娅，王艳敏，等.GC-MS测定动物组织中五氯酚钠的不确定度评定 医学与检验医学，2019，8，37（4）：

568-572.

[5]张丽芳，康俊杰，张建雄，等.液相色谱质谱法测定鸡肉中尼卡巴嗪残留标志物残留量的不确定度评定[J/OL].中国动物传染病学报：1-10[2021-07-20].http：//kns.cnki.net/kcms/detail/31.2031.s.20210427.1057.026.html.