张琳琳 陈影 滕膈玲 杨燕 魏敏 胡华

(山东省胸科医院呼吸科，山东 济南 250013)

肺癌的死亡率和发病率在恶性肿瘤排行榜均居首位〔1,2〕。近年，肺癌在中国的发病率明显呈增加趋势。尽管医疗水平和新药均不断发展，使肺癌的预后得到改善，但晚期肺癌的预后及总生存率仍处于较低的水平。因此，提高肺癌的早期诊断及预后率具有重要意义。肿瘤坏死因子(TNF)-α为TNF的成员之一，其常作为免疫因子或炎性因子在实验及临床上应用〔3〕。TNF-α也参与调控肿瘤的发生发展，如其可可诱导增殖特异性转录因子FoxM1表达，通过调节FoxM1/活性氧/低氧诱导性因子(HIF)-1途径导致肝癌细胞增殖及凋亡抑制〔4〕。但TNF-α在肺癌中的作用及机制研究甚少。miRNA是在转录及转录后水平调控基因表达的单链、长度在19～25 nt的小分子RNA〔5〕。miR-363-3p已被证实在多种癌症中发挥功能，但其在肺癌中miR-363-3p的作用机制尚未完全阐明。组蛋白甲基转移酶(EZH2)为组蛋白甲基转移酶，为多梳基因蛋白家族的关键成员〔6〕。大量研究证实，EZH2在癌组织中表达异常升高，且与癌症的恶性程度呈正相关〔7〕。但EZH2在肺癌中与miR-363-3p和TNF-α的作用关系尚未见报道。本研究着重分析TNF-α对肺癌细胞生物学行为的影响，揭示其机制与miR-363-3p/EZH2通路的关系。

1 材料与方法

1.1材料 人肺癌细胞A549购自ATCC；EZH2兔抗人单克隆抗体、TNF-α兔抗人单克隆抗体购自Abcam公司；免疫组织化学试剂购自北京中杉公司；LipofectamineTM2000、逆转录试剂盒、BCA蛋白定量试剂盒购自大连Takara公司；Transwell小室、基质胶购自美国Coming公司；放射免疫沉淀蛋白裂解液(RIPA)、电化学发光(ECL)发光液均购自碧云天生物技术公司；……