聂涵，周晓煦，赵越，田文

（中国医科大学 1.附属第一医院老年医学科，沈阳 110001；2.基础医学院细胞生物学教研室，沈阳 110122）

血管钙化指钙盐病理性地沉积在血管组织中，其普遍存在于衰老、糖尿病和慢性肾病的病理过程。血管钙化被认为是一个复杂并受高度调控的主动过程［1］，血管平滑肌细胞的表型转化是关键环节，即从收缩表型转分化为类成骨细胞表型，收缩表型特异性基因下调（例如平滑肌α-肌动蛋白），同时骨形成标志物上调，包括Runt相关转录因子（runt-related transcription factor 2，Runx2）和碱性磷酸酶［2］。绝经前女性血管钙化发病率极低，绝经后雌激素替代治疗能显著减少血管钙化的发生［3］。雌激素通过雌激素受体（estrogen receptor，ER）依赖的方式抑制人血管平滑肌细胞中的骨形成信号传导通路，从而减轻血管钙化［4］。

泛素特异性蛋白酶22（ubiquitin specific peptidase 22，USP22）可使组蛋白去泛素化，从而增强其稳定性，进而导致相关基因的转录增加。前期研究［5］发现，USP22是核受体转录激活的重要辅调节因子。提示USP22可能作为ER的辅调节因子参与转录调控，并参与血管钙化的相关过程。本研究将人动脉平滑肌细胞（human aortic smooth muscle cells，HASMCs）钙化模型作为载体，证实USP22与ERα之间的相互作用，并探讨其对血管钙化进程的影响。

1 材料与方法

1.1 实验材料

HASMCs购自湖南湘雅细胞库。高糖DMEM（Dulbecco’s modified eagle medium）培养基粉末（美国Gibco公司）；胎牛血清（德国SeraPro公司）；β-磷酸甘油粉末、茜素红染液；雌二醇（美国Sigma-Aldrich公司）；LipofectamineTM3000 Transfection reagent、jetPRIME transfection reagent（美国Polyplus公司）；质粒提取及纯化试剂盒（美国OMEGA bio-tek公司）；双荧光素酶基因检测试剂盒（美国Promega公司，Dual-Luciferase Reporter Assay System，E1960）；蛋白酶抑制剂（瑞士Roche公司）；BCA蛋白浓度检测试剂盒（中国凯基生物）。……