廖昕萌，潘炜伦，冯俊杰，李博

(南方医科大学南方医院检验医学科，广州 510515)

细胞外囊泡(extracellular vesicles, EVs)是活细胞分泌到细胞外的膜性囊泡，依据粒径和来源可将其分为：外泌体、微囊泡和凋亡小体[1]。EVs内含有多种生物分子，可参与细胞间信息交流，并反映疾病状况以辅助临床诊断和治疗[2]。EVs广泛分布于血浆、尿液、脑脊液等各类体液[3]，其中血浆标本因具有采集、处理和保存的方法成熟、取材方便、EVs含量丰富(108～1013颗粒/mL)[3]、不同生理和病理条件下EVs数量及其内容物含量差异大等特点，故而血浆EVs在疾病的早期诊断、疗效监测和预后判断中具有极大优势，成为了近年来研究的热点。但血浆EVs的传统分离方法受到多种血浆成分的干扰，难以实现EVs的高效分离，因此，近年来发展了许多新型分离方法以应对传统血浆EVs分离遇到的难题。本文将分析传统血浆EVs分离和鉴定方法，并重点从新型亲和法、微流控法和联合应用法3个方面介绍新型分离方法的研究进展，以期为血浆EVs分离方法的发展提供参考和借鉴。

1 传统的血浆EVs分离和鉴定方法

传统的血浆EVs分离方法包括超速离心法(ultracentrifuge, UC)、超滤法(ultrafiltration, UF)、沉淀法(precipitation)、色谱法(size exclusion chromatography, SEC)和免疫亲和法(immunoaffinity)等(表1)。由于受到血浆中多种复杂成分的干扰，使用传统方法分离血浆EVs存在分离效率低、纯度低、特异性低、EVs受损变性或生物活性低等缺陷，因此，分离后常需使用多种鉴定方法从不同维度验证分离产物(表2)。

表1 常用的传统血浆EVs分离方法

表2 常用的血浆EVs鉴定方法

2 新型血浆EVs分离方法

如今许多新型血浆EVs分离方法能克服传统分离方法的缺陷，实现血浆EVs快速分离，并提高产率、纯度和特异性，满足多种应用的需求。……