刘安，马定远，刘刚，林颖，李璃，许争峰，钟天鹰

(南京医科大学附属妇产医院&南京市妇幼保健院a.产前诊断中心，b.检验科，南京210004)

血友病B(hemophilia B, HB)是一种X连锁隐性遗传性出血性疾病，其发病机制为凝血因子Ⅸ(coagulation factor Ⅸ, FⅨ)的编码基因F9缺陷所导致的凝血功能障碍[1]。在男性人群中HB的发病率为1/30 000；女性血友病患者罕见，通常为携带者[2]。根据症状的轻重及凝血因子Ⅸ活性(factor Ⅸ coagulant activity, FⅨ:C)，临床上将HB分为轻型(FⅨ:C 5%～40%)、中型(FⅨ:C 1%～5%)和重型(FⅨ:C<1%)。HB的主要表现为出血，出血部位为皮肤黏膜、关节、肌肉及深部组织器官，可危及生命[3]。目前临床上尚无有效的根治方法，患者主要以输注FⅨ制剂或新鲜全血的替代治疗为主。因此，开展F9基因诊断、携带者筛查及产前诊断具有重要的临床应用价值[1,3]。本研究应用Ion Torrent半导体测序技术对11个HB家系进行F9基因突变分析，以期明确遗传病因，为进一步指导妊娠提供实验依据。

1 材料与方法

1.1研究对象 收集2014年2月至2018年10月于南京市妇幼保健院遗传咨询及产前诊断门诊就诊的11个HB家系，其中家系3有3例患者。13例患者在本院或者外院诊断为HB，其中11例患者在本院进行了基因诊断，其余2例患者在外院进行基因诊断。对11个家系中的女性成员进行携带者筛查，并为7个家庭提供了产前诊断。家系成员非近亲结婚，染色体核型和微阵列检测未发现染色体结构异常或拷贝数变异，并对其进行Ion Torrent半导体测序检测以寻找致病基因及位点。本研究获得南京市妇幼保健院医学伦理委员会批准(宁妇伦字[2019]-KY086)，患者本人或患儿家属均签署知情同意书。

1.2主要仪器及试剂 Lab-Aid 820核酸提取仪(厦门致善公司)，ABI A3500Dx基因分析仪(美国Applied Biosystems公司)。血液DNA提取试剂盒(美国Omega公司)，Lab-Aid核酸(DNA)分离试剂盒(厦门致善公司)，21-三体和性染色体多倍体检测试剂盒(广州达安基因公司)。Ion AmpliSeq Library Kit 2.0试剂盒、Ion PGM Sequencing 200试剂盒、Ion OneTouch系统、Ion Torrent 316芯片及Ion Torrent PGM测序仪均由美国Life technologies 公司提供，Sanger测序试剂和配套仪器由美国Applied Biosystems公司提供，PCR扩增试剂购自南京诺唯赞公司，SALSA mLPAPO95染色体非整倍体检测试剂盒(荷兰MRC Holland公司)。……