申俊杰，李爱萍，申铭，马国瑞

1.内蒙古医科大学附属医院普外科，内蒙古 呼和浩特 010050；2.华中科技大学同济医学院附属同济医院胆胰外科，湖北 武汉430030

肝脏缺血再灌注损伤(hepatic ischemia reperfusion injury，HIRI)是肝脏手术、创伤及失血性休克后发生肝衰竭的重要原因。目前研究认为HIRI的发生与钙超载、细胞凋亡、内皮素及补体系统、代谢性酸中毒等多种因素相关[1]，因而探索新的保护HIRI的药物至关重要。百里醌(thymoquinone，TQ)是一种具有抗氧化、抗炎症作用的天然化合物，对糖尿病、动脉粥样硬化的防治具有较好的效果。而且，百里醌对人正常胰腺导管上皮细胞、前列腺上皮细胞、小肠细胞等正常细胞无毒性损害[2]。前期研究发现，百里醌能预防HIRI，但其具体机制不明。因此，本研究将进一步探讨百里醌通过抑制凋亡、抗氧化应激等改善HIRI的具体分子机制。

材料与方法

一、实验动物

选用200～250 g重量SPF级健康雄性SD大鼠，均购自武汉大学动物实验中心。完成该实验所有动物操作均符合动物试验伦理要求。

二、材料和试剂

百里醌(Sigma公司，美国)用无菌无水乙醇配制成10 mmol/L的储存液，-20 ℃保存。Bax、Bcl-2、裂解的胱天蛋白酶(Cleaved-caspases)-3、Cleaved-caspases-9、β-actin抗体购自圣克鲁斯生物技术公司。LKB1、磷酸化(p)-LKB1(Ser428)、AMPK、p-AMPK[酪氨酸(Thr)172]多克隆抗体购自美国Novus公司。丙氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST)酶联免疫吸附试验(ELISA)试剂盒均购自武汉华美生物有限公司。大鼠丙二醛(MDA)、谷胱甘肽过氧化物酶(GPX)、谷胱甘肽(GSH)、超氧化物歧化酶(SOD)ELISA试剂盒购自美国R&D公司。肝脏细胞凋亡采用原位末端标记(TUNEL)凋亡检测试剂盒(碧云天生物科技公司)。……