常选妞，杨新玲，杨建平

(1.河南牧业经济学院河南省非常规饲料资源创新利用重点实验室，河南 郑州 450046；2河南牧业经济学院理学院，河南 郑州 450046；3.河南牧业经济学院河南省高校饲料工程技术研究中心，河南 郑州 450046)

0 引言

单宁酸是由五倍子提取得到的一种鞣酸，单宁酸结构中含有多酚基团，有很强的生理活性功能，单宁酸的抗菌、消炎、促生长和防治肠道腹泻，抑制大肠杆菌、轮状病毒的作用在动物营养界被广泛关注「1」。关于单宁酸的测定标准有LY/T 1642-2005《单宁酸分析试验方法》「2」和GB/T 27985-2011《饲料中单宁的测定分光光度法》「3」，这两个标准针对测定高含量的单宁酸原料，且操作繁琐、耗时、所用试剂多。而对基质复杂的常规配合饲料、浓缩饲料、混合型饲料添加剂中低含量的单宁酸的检测方法尚未有报道。本研究建立以高效液相色谱测定饲料中单宁酸方法，方法简便、快捷、准确，适合饲料企业作为质量控制的方法。

1 材料与方法

1.1 仪器与试剂

Waters 2695高效液相色谱仪；W2487双通道紫外可见检测器；甲醇(色谱纯，Fisher)；乙腈(色谱纯，Fisher)；单宁酸标准品(含量≥95.2%)。

单宁酸标准溶液：准确称取单宁酸标准品25 mg(精确至0.1 mg)，置于100 mL容量瓶中，用水溶解，定容至刻度，摇匀。该储备液的浓度为250 μg/mL。

单宁酸标准工作液：准确移取不同体积的储备液，用水配制成不同浓度的标准工作液。

1.2 样品前处理

称取配合饲料样品5.0 g，浓缩饲料3.0～5.0 g，预混料1.0 g置于50 mL离心管中，加入20%甲醇溶液25.00 mL，涡旋15 min，8 000 r/min 离心5 min，取出上清液，残渣用20%甲醇溶液25.00 mL重新提取1次。合并2次提取液，混匀，精密移取提取液适量，50℃氮吹干，加5.00 mL 20%甲醇溶液复溶，取上清液过0.45 μm滤膜，上机测定。……