马琳，温红雨，王学敏，高洪文，庞永珍

紫花苜蓿的克隆及功能研究

马琳，温红雨，王学敏，高洪文，庞永珍

中国农业科学院北京畜牧兽医研究所，北京 100193

分枝是重要的产量构成因子，在紫花苜蓿育种中至关重要。发掘紫花苜蓿分枝相关基因并明确其作用机理，有助于加快紫花苜蓿高产优质育种。是重要的分枝相关基因，参与多种植物的分枝调控。【】通过对紫花苜蓿功能的研究，为建立调控紫花苜蓿分枝发育分子机制奠定基础。利用同源克隆的方法从紫花苜蓿中获得的基因序列。通过Expy Protparatam、DNAMAN和MEGA-X等软件对进行序列分析并构建系统进化树。采用实时荧光定量PCR（qPCR）方法分析在紫花苜蓿中的组织表达特异性。运用烟草瞬时表达系统确定MsMAX2蛋白的亚细胞定位。利用农杆菌介导的转化方法获得转基因拟南芥，以明确的基因功能。用酵母双杂交技术探明与MsMAX2互作的蛋白。包含长度为2 136 bp的开放阅读框，编码由711个氨基酸构成的蛋白，属于F-box蛋白超家族。系统进化分析表明，及其同源基因的进化与物种的分化高度相似，表明其是一个功能保守的基因。在紫花苜蓿的颈部组织中表达量最高，苗期叶片和授粉当天的花序中表达量较高，根中次之，其他组织表达量相对较低，暗示其在紫花苜蓿多个组织中发挥作用。亚细胞定位试验表明MsMAX2蛋白定位于细胞核中。在拟南芥突变体中过表达可互补突变体的多分枝表型。酵母双杂交试验表明MsMAX2与激素受体D14存在依赖于独脚金内酯的相互作用。……