曲潇玲，焦裕冰，罗健达，宋丽云，李莹，申莉莉，杨金广，王凤龙

本氏烟的克隆及对马铃薯Y病毒侵染的抑制作用

曲潇玲，焦裕冰，罗健达，宋丽云，李莹，申莉莉，杨金广，王凤龙

中国农业科学院烟草研究所，山东青岛 266101

【】马铃薯Y病毒（potato virus Y，PVY）是危害我国烟草生产的最重要病毒之一，NAC转录因子与植物的抗病、抗逆密切相关，本论文克隆进行生物信息学分析，并研究其在PVY侵染过程中的作用，为烟草抗病毒药剂的开发提供靶标。以本氏烟（）为材料克隆，利用MEGA、UniProt、SMART、TMHMM Server 2.0、Sol Genomics Network、PlantCARE等技术进行生物信息学分析；利用激光共聚焦与实时荧光定量PCR（quantitative real-time PCR，qRT-PCR）明确PVY侵染前后NbNAC062蛋白定位及mRNA表达量变化；基于病毒介导的基因沉默（virus-induced gene silencing，VIGS）和过表达技术，构建pTRV::NbNAC062沉默载体与pEarleyGate100::RFP::NbNAC062过表达载体，采用qRT-PCR和Western blot检测在本氏烟中沉默与过表达后，PVY的积累量变化及未折叠蛋白应答（unfolded protein response，UPR）相关基因的表达差异。编码646个氨基酸，N端28—179 aa为NAC结构域，129—185 aa为DNA结合区域，C末端621—643 aa为疏水跨膜结构，系统进化树与蛋白序列分析表明本氏烟与渐狭叶烟草亲缘关系最近。启动子中包含脱落酸、茉莉酸甲酯、水杨酸以及逆境响应相关的多种顺式作用元件。PVY侵染激活NbNAC062从细胞膜转移至细胞核，且诱导上调表达。PVY侵染本氏烟5、7 d，处理组mRNA水平分别为对照组的2.52、1.95倍；PVY侵染3 d，mRNA表达量为对照组的2.39倍，PVY侵染7 d，表达量极显著低于对照组，下调表达56.77%。本氏烟沉默并接种PVY，接种后3、5、7 d，与对照组相比，沉默组PVYmRNA上调表达，分别为对照组的2.12、2.41、1.38倍，mRNA表达量则下调，分别下调28.19%、58.11%、10.77%，接种后5、7 d沉默组PVY CP蛋白含量亦显著高于对照组。过……