薛静秀 李 涛 马 哲 任 建 马思雨 刘 娜

将天然植物提取物作为抑菌类漱口水的有效成分可以减少因使用化学制剂漱口水引起的一些副作用，如牙齿变色、口腔黏膜刺激症状、味觉减退等[1，2]。EGCG 是从茶叶中分离得到的儿茶素类单体，对变异链球菌具有一定的抑制作用[3，4]，但是EGCG单独作用时生物利用度相对较低，与其他物质配伍应用可提高其作用效率[5]。绿原酸是植物细胞通过莽草酸途径合成的一种苯丙素类物质[6]，其溶液口感醇和，刺激性小，对变异链球菌亦有一定的抑制作用，适用于开发抗龋漱口水产品[7]。本研究将二者配伍应用，测定不同浓度混合液对变异链球菌产酸、粘附及生物膜形成的影响，为其应用于龋病预防提供研究基础。

资料和方法

1.主要试剂及用品：EGCG（纯度96%）、绿原酸（纯度98%），洗必泰（购自深圳南粤药业有限公司），牛脑心浸出液培养基（brain heart infusion，BHI）（购自杭州微生物试剂有限公司），BHI 固体培养基（购自青岛高科技工业园海博生物技术有限公司），全波长酶标仪系统（Power Wave XS2，美国），台式 pH 计（Mettler Toledo，瑞士），激光共聚焦显微镜（Olympus，日本），国际标准菌株变异链球菌ATCC25175（购自广东省微生物研究所）。

2.菌液制备：将冻存菌株复苏，传代，鉴定，然后挑取2～3 个菌落接种于BHI 液体培养基，37℃恒温培养24h，离心，涂片，用生理盐水调节菌浓度为1.5×108CFU/ml。

3.实验药液的制备：EGCG 与绿原酸母液：将EGCG 与绿原酸溶解于无菌BHI 液体培养基中，配置浓度为1mg/ml EGCG 母液与20mg/ml 绿原酸母液，密封于4℃冰箱避光保存。

噻唑蓝溶液[3-（4，5-dimethyl-2thiazolyl）-2，5-diphenyl-2-H-tetrazolium bromide，MTT]：避光条件下称取0.15g MTT 溶于30ml PBS 缓冲液中，配制成浓度为5mg/ml 的储备液，现配现用。……