李 鑫， 高佩然， 边秀举， 王丽宏， 李会彬， 刘 畅， 董康挺， 孙鑫博

(河北农业大学农学院/河北省作物生长调控重点实验室， 河北 保定 071000)

植物原生质体是指细胞壁以内的原生质部分，即细胞通过质壁分离后，去除细胞壁的由质膜包被的裸露细胞，具有细胞全能性，其广泛应用于植株再生[1]、体细胞杂交[2]、基因功能研究[3]、植物生化过程研究[4]等。自1960年Cocking等[5]首次利用纤维粗制酶，从番茄(Solanumlycopersicum)根尖分离出原生质体以来，现已在拟南芥(Arabidopsisthaliana)[6]和烟草(NicotianatabacumL.)[7]中建立了原生质体分离系统。马晖玲等[8]在草地早熟禾(PoapratensisL.)‘午夜Ⅱ号’中建立了原生质体分离和培养体系，并再生出完整植株；李妮娜[9]在陆地棉(GossypiumhirsutumLinn.)中建立了原生质体分离体系，并以此为受体获得了能够有效表达融合蛋白的原生质体瞬时表达系统。然而在匍匐翦股颖中并未有成功分离原生质体的报道，因此高效遗传转化技术的开发可为后期匍匐翦股颖的基因功能研究提供基础。

瞬时表达是近年来发展的一种快速的、高效的检测蛋白质表达的方法，逐渐应用到生物学各研究领域中[10]。同时，原生质体作为一种理想的单细胞系统，因没有细胞壁的限制，成为构建植物瞬时表达体系的良好试验材料[11]。在植物原生质体中进行瞬时表达时间短、重复性好、转化效率高，被广泛应用到基因克隆与分析、启动子活性、亚细胞定位、蛋白质互作分析等方面[10]。尹启琳[12]通过瞬时表达系统，构建了小麦(TriticumaestivumL.)‘济麦22号’TaCKX1基因靶向编辑载体，并通过测序检测了相关基因突变。……