赵 娟，王志宇，段昌学，王志俊，刘一飞，赵 敏，韩洁茹，李正莉

(1.山西农业大学动物医学学院，山西 太原 030032；2.陕西省商洛市动物疫病预防控制中心，陕西 商洛 726000)

肠道菌群种类繁多，菌群计量及检测有较大困难，国内外学者已建立了许多诊断方法，如细菌分离鉴定、凝集试验、琼脂扩散试验、荧光抗体技术、ELISA(酶联免疫吸附试验)试剂盒等，但这些方法均费时费力，而且灵敏性均不理想，不适用于常规的临床诊断，更不适用于集约化生产中细菌检测的需要。随着分子生物学检测技术的快速发展，以及聚合酶链反应技术的广泛应用，特别是16S rRNA被广泛应用于细菌的鉴定，分子生物学检测方法PCR用于Lactobacillus和Bifidobakterien定量的检测具有快速、灵敏、特异等优点，但假阳性较多，缺乏准确定量等缺点限制了PCR在实际临床中的应用[1]。近年来，FQPCR技术以其特异性强、灵敏度高、稳定性强等优点在微生物的定性和定量检测等方面得到广泛应用。本研究建立了快速检测Lactobacillus和Bifidobakterien的FQ-PCR方法，不仅保留了PCR的优点，而且克服了普通PCR的不足，为动物肠道微生态的测定建立了一种更为有效的方法[2]。

1 材料与方法

1.1 仪器设备

微量移液器(Eppenderf公司，10 µL、100 µL、200 µL、1 000 µL型)，PCR仪(QIAGEN，Rotor-Gene Q型)，高速低温离心机(Sigma，2-16PK型)，电子天平(METTLER TOLEDO，AL104-IC型)，高速离心机(Eppendorf，1-14型)，摩尔基因型超纯水机(上海摩勒生物科技有限公司，MO6-063型)，立式压力蒸汽灭菌锅(上海博讯实业有限公司医疗设备厂，YXQ-LS-SⅡ型)，电热恒温鼓风干燥箱(上海联进医疗器械厂，101-2-BS-Ⅱ型)，超低温冰箱(中科美菱公司)。

1.2 主要试剂和材料

QIAamp DNA Stool Mini Kit购自Qiagen公司；……