辛 娜， 邓露芳*， 郭 亮*， 黄玉海， 班文杰， 宗文丽， 刘宪辉

（1.北京三元种业科技股份有限公司饲料分公司，北京101105；2.北京首农畜牧发展有限公司，北京100076）

随着全球范围内对抗生素的禁用，人们更加关注食品安全，追求绿色养殖。探寻绿色、安全、高效的抗生素替代品逐渐成为畜牧业的研究热点。目前研究较多的有益生菌、植物提取物、酸化剂、酶制剂、抗菌肽等（卜孟娟等，2019；韩冰等，2017；卢国民等，2014；Cheng等，2014）。如何筛选并评价这些新型抗生素替代品显得非常重要。本试验旨在通过牛津杯扩散法筛选出具有体外抑菌效果的乳酸菌及饲料添加剂产品，为饲料替抗技术的应用提供参考依据。

1 材料与方法

1.1 试验材料

1.1.1 菌株和饲料添加剂 乳酸菌菌株H1、H2、H3、H4、H5、H6、H7、H8为北京绿荷康牧生物科技有限公司实验室筛选并保存。经生理生化反应及16s rRNA结合鉴定为嗜酸乳杆菌、保加利亚乳杆菌、干酪乳杆菌、植物乳杆菌、长双歧杆菌、屎肠球菌、乳酸乳球菌、嗜热链球菌。苯甲酸、单宁酸、葡萄糖氧化酶、肠杆菌肽、溶菌酶，由北京三元种业科技股份有限公司饲料分公司提供。

1.1.2 指示菌和培养基 大肠埃希氏菌（ATCC25922）、金黄色葡萄球菌（ATCC25923）、鼠伤寒沙门氏菌（ATCC14028）购于广东环凯生物科技有限公司。营养琼脂、营养肉汤、MRSbroth、MRSagar购自北京陆桥技术股份有限公司

1.1.3 其他 灭菌锅、洁净工作台、培养箱、烘箱、水浴锅、牛津杯（内径6 mm，外径8 mm）、镊子、一次性培养皿、无水乙醇、0.9%生理盐水。

1.2 试验方法 对致病菌的抑制试验参照刘冬梅等（2006）牛津杯扩散法。取灭菌营养琼脂，待温度降至50℃左右时倒平板，每个平皿约15 mL。……