刘 晓， 兰 图， 刘芳静， 蹇京宴， 甘榆讯

自贡市第一人民医院 眼科，四川 自贡 643000

糖尿病性视网膜病变(diabetic retinopathy，DR)是糖尿病主要的微血管并发症之一，其病变基础是人视网膜内皮细胞(human retinal endothelial cells，hRECs)功能障碍[1]。在高糖(high glucose，HG)作用下，hRECs启动氧化应激，产生大量活性氧簇(reactive oxygen species，ROS)；而硫氧还蛋白相互作用蛋白(thioredoxin interacting protein，TXNIP)可抑制硫氧还蛋白的抗氧化功能，导致HG作用下的hRECs产生ROS积累和氧化应激损伤[2]。TXNIP是细胞氧化应激和含NLR家族Pyrin域蛋白3(NLR family pyrin domain containing protein 3，NLRP3)炎症小体之间的桥梁[3]。NLRP3炎症小体是细胞内固有免疫蛋白，被认为是病原体和损伤相关分子模式的传感器。而葡萄糖异常被认为是无菌炎症反应的重要触发因素，这种炎症反应主要由NLRP3炎症小体介导[4]。因此，ROS/TXNIP/NLRP3通路可能是治疗因HG引起的微血管病变的有效作用靶点。维生素D(vitamin D，VD)是一种可溶于脂肪的甾体类药物，其活性代谢产物1,25-(OH)2D3与内源性细胞因子类似，可参与多种信号通路的调节，包括抑制凋亡、抗氧化、抗炎、免疫调节等[5]。苏娇等[6]研究发现，血清1,25-(OH)2D3水平降低是2型糖尿病患者DR的独立预测因子。本研究旨在探讨VD3在介导HG诱导的hRECs凋亡及NLRP3炎症小体活性中的作用，并分析ROS/TXNIP/NLRP3通路在VD3抑制hRECs凋亡过程中的作用。现报道如下。

1 材料与方法

1.1 细胞 hRECs(货号：ACBRI 181)由美国Kirkland细胞实验室提供。

1.2 主要试剂与仪器 Lonza EGM-2 BulletKit内皮细胞培养基购自瑞士Lonza公司；N-乙酰半胱氨酸(N-acetylcysteine，NAC)购自美国Sigma公司；Ultrapure RNA提取试剂盒、HiFi-MMLV cDNA合成试剂盒、SYBR Green Master Mix试剂盒购自北京CWBIO公司。CCK-8试剂盒、ROS检测试剂盒、丙二醛(malondialdehyde，MDA)检测试剂盒、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase，SOD)检测试剂盒、谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase，GSH-Px)检测试剂盒、白细胞介素1β(interleukin 1β，IL-1β)、白细胞介素18(interleukin 18，IL-18)试剂盒购自南京建成生物研究所；……