王君君，李建香，张子健，过伟峰*

（1. 南京中医药大学，江苏 南京 210023；2. 南京中医药大学附属南京中医院，江苏 南京 210023）

脑出血（intracerebral hemorrhage，ICH）是一种原发性非外伤性脑实质内出血，在我国约占全部卒中患者的20%～30%［1］，急性期病死率约30%～40%，预后不良，甚则致残。脑出血后数分钟即可产生血肿占位，颅内压升高，继而出现低灌注，浸润组织产生炎性反应［2］。国医大师周仲瑛创立的凉血通瘀方具有通腑泄热、凉血化瘀之功效，笔者应用此方治疗急性脑出血，前期临床研究观察证实其有助于改善神经系统症状体征，减轻病情，改善预后［3］，实验研究有抗炎效应［4］。本研究采用凉血通瘀方干预脑出血大鼠模型，观察其对脑组织TLR4 和NF-κB p65 的影响，并探讨其可能的作用机制。

1 材料

1.1 实验动物

健康雄性成年SD大鼠24只，体质量220～300 g，购自江苏省青龙山动物繁育中心，许可证号：SCXK（苏）2017-0001。置于南京中医药大学实验动物中心饲养：5只大鼠为一笼，不限制饮水、摄食，给予恒温恒湿、12 h光照与12 h黑暗交替环境。本实验方案经由南京中医药大学实验动物伦理委员会审核，批准号为：201905A041。

1.2 实验药物

凉血通瘀方药组成：熟大黄10 g，水牛角（先煎）30 g，生地黄20 g，赤芍15 g，牡丹皮10 g和石菖蒲10 g，购自安徽沪春堂中药饮片有限公司。制成每毫升含1.1 g鲜药的水煎剂药液，放置于冰箱4 ℃保存备用。

1.3 实验试剂

蛋白酶抑制剂混合物（货号：P1005）、裂解液（货号：P0013B）、PMSF（货号：ST505）、蛋白Marker（货号：P0075）、4 × 上样缓冲液、BCA 蛋白浓度测定（货号：P0010S）、β-巯基乙醇（上海碧云天生物技术有限公司）；过硫酸铵、Tween-20（北京索莱宝科技有限公司）；TLR4 抗体（货号：ab217274）、羊抗兔IgG H&L 二抗（货号：ab6721）、内参抗体（货号：ab181602）［艾博抗（上海）贸易有限公司］；……