王典博 任付先 赵钰 郑胜昌

457001 濮阳市油田总医院心内科

心房颤动(简称“房颤”)是心血管疾病中最常见的心律失常类型，对患者的生活和家庭带来极大的影响[1]。心房纤维化被认为是房颤的重要病理因素，且与房颤复发相关[2]。射频消融术是目前治疗持续性房颤的主要方式，但有研究显示射频消融术后复发率较高[3]。微小RNA(microRNA，miRNA)为有效治疗房颤提供了很多策略。Martinez等[4]发现，心肌梗死大鼠心脏中miR-31表达水平上调，且对心脏功能有害。另有研究发现，miR-27b过表达可减弱心房纤维化，但具体机制不清楚[5]。近年来，房颤乃至心律失常已成为研究热点，本研究拟探究持续性房颤射频消融治疗后血清中miR-31、miR-27b相对表达水平与房颤复发的关系。

1 对象和方法

1.1 研究对象

本研究为前瞻性研究。选取2016年10月至2019年12月濮阳市油田总医院收治的首次行射频消融术的持续性房颤患者114例(持续性房颤组)，其中男性76例，女性38例，年龄25～64岁，平均(50.7±12.8)岁，持续性房颤诊断标准参照《美国心房颤动治疗指南(2006年修订版)》[6]。纳入标准：(1)患者持续性房颤超过7 d，不能自行恢复，需要服药或电复律才能终止；(2)第一次进行射频消融术，均由两位有经验的主治医师进行手术；(3)患者有不少于3份的常规心电图或动态心电图支持房颤诊断；(4)本人及家属知情同意并签署知情同意书。排除标准：(1)合并风湿性心脏瓣膜病、先天性心脏病、冠心病、心肌病；(2)遗传性心律失常病史；(3)有心脏外科手术史；(4)合并甲状腺功能亢进、肺和全身性感染以及慢性肺功能不全；(5)伴有恶性肿瘤、自身免疫疾病；(6)有急性脑血管病史；(7)消融失败。同期选择性别、年龄匹配的健康体检者114例为对照组，其中男性68例，女性46例，年龄26～65岁，平均(51.9±13.5)岁。本研究经本院伦理委员会批准(伦理批号：L-2016-0129)。

1.2 研究方法

1.2.1 样品采集 采集空腹时所有对照组体检当天及持续性房颤组患者术后6 h静脉血6 ml，在4℃、3 000 r/min条件下，离心25 min，结束后收集上层血清，保存于-80℃条件下，待测。

1.2.2 qRT-PCR法检测血清中miR-31、miR-27b的相对表达水平 取出收集的受试者血清样品室温下解冻，按照RNA提取试剂盒操作步骤，提取总RNA。检测RNA纯度，OD260/OD280约为1.8～2.0，表明RNA可用于反转录，依据反转录试剂盒操作步骤反转录得到cDNA。采用qRT-PCR仪对miR-31、miR-27b及内参U6进行扩增反应。反应条件：95℃预热6 min；95℃，30 s；58℃，30 s；72℃，30 s；30个循环；72℃，10 min。对miR-31、miR-27b相对表达量用2-ΔΔCT法计算。

1.3 临床数据收集

入院后，采集持续性房颤患者的基线临床资料，包括性别、年龄、体质指数、高血压、冠心病和糖尿病病史、房颤持续时间。射频消融术后，采集患者的超声心动图指标，包括左心房内径、左心室射血分数(left ventricular ejection fraction，LVEF)；全自动生化分析仪检测血液生化指标，包括三酰甘油(triglyceride，TG)、总胆固醇(total cholesterol，TC)、低密度脂蛋白胆固醇(low density lipoprotein cholesterol，LDL-C)、高敏C反应蛋白(hypersensitive C-reactive protein，hs-CRP)、N末端B型利钠肽原(N-terminal pro-brain natriuretic peptide，NT-proBNP)。

1.4 随访

对持续性房颤患者随访6个月，随访方式为门诊复查或电话随访。随访期间患者出现胸闷、心悸等不适症状立即行心电图检查，或术后每2个月进行常规复检。房颤复发定义：患者行常规心电图或24 h动态心电图，显示发生持续时间≥30 s的房颤、房扑或房速，即为复发。根据患者随访时是否复发房颤分为复发组41例，未复发组73例。本次随访研究中无患者失访。

1.5 统计学方法

2 结果

2.1 对照组与持续性房颤组血清miR-31、miR-27b相对表达水平比较

与对照组比，持续性房颤组患者的血清miR-31(1.67±0.58比1.05±0.36)、miR-27b(2.13±0.58比1.11±0.22)相对表达水平较高(均为P<0.05)。

2.2 房颤复发组与未复发组临床基本资料比较

与未复发组比，复发组血清中hs-CRP、NT-proBNP水平较高(均为P<0.05)，左心房内径较大(P<0.05)，见表1。

表1 房颤复发组与未复发组患者的临床基本资料比较

2.3 房颤复发组与未复发组血清miR-31、miR-27b相对表达水平比较

与未复发组比，复发组患者的血清miR-31(1.94±0.64比1.32±0.42)、miR-27b(2.71±0.91比1.64±0.33)相对表达水平较高(均为P<0.05)。

2.4 血清miR-31、miR-27b表达水平与术后复发患者检查指标的相关性分析

持续性房颤术后复发患者的血清miR-31、miR-27b表达水平与左心房内径、hs-CRP、NT-proBNP均呈正相关(均为P<0.05)，见表2。

表2 相关性分析

2.5 血清miR-31、miR-27b对持续性房颤射频消融术后复发的诊断价值分析

ROC曲线分析结果显示，血清miR-31、miR-27b相对表达水平诊断持续性房颤射频消融术后复发的曲线下面积(AUC)分别为0.801、0.868，敏感度分别为73.20%、78.00%，特异度分别为83.60%、87.70%，截断值分别为1.739、1.916；二者联合诊断持续性房颤射频消融术后复发的AUC为0.915，敏感度为80.50%，特异度为95.90%，与miR-31(Z=1.966，P=0.025)和miR-27b(Z=0.929，P=0.177)诊断持续性房颤射频消融术后复发的AUC相比差异均有统计学意义。

3 讨论

房颤主要由心房重构、肾素-血管紧张素-醛固酮系统异常、自主神经系统改变、炎症反应等引起[7]。有研究显示，房颤患者肺静脉大环隔离消融术后1年复发率为30.2%，持续性房颤患者术后的复发率为50.0%[8]。生理实验显示，持续性房颤患者心房细胞多呈纤维化、肥大等现象[9]。NT-proBNP是机体应激反应的一种保护因子，孙小艳等[10]发现持续性房颤患者血浆中NT-proBNP水平显著高于健康对照者，射频消融手术失败患者血浆中NT-proBNP水平显著高于手术成功者，可能与手术失败患者术后心肌细胞炎症反应、纤维化更严重有关。有文献研究显示，左心房内径的增加会导致心房肌纤维之间的连接出现异常，与未复发组相比，复发组患者血清中hs-CRP水平显著升高，左心房内径显著增大，且左心房内径是房颤发生的危险因素[11]。本研究发现，复发组患者血清中hs-CRP、NT-proBNP水平显著高于未复发组，左心房内径显著大于未复发组，提示hs-CRP、NT-proBNP、左心房内径可能与持续性房颤患者射频消融术后手术效果有关。

深入研究miRNA表达异常是探讨房颤发生机制的潜在领域[12]。miRNA对神经系统疾病、心血管疾病以及细胞的增殖和分化等都可调控[13]。Lv等[14]发现，miR-27b通过靶向Wnt3a来调节Wnt/β-连环蛋白的信号传导途径，可能在心房纤维化和房颤的发生中起重要作用。心房纤维化通过激活Smad途径影响房颤的发展。miR-31在由缺血/缺氧引起的心肌肥大的发展中起关键作用。曾俊义等[15]研究显示，miR-31表达水平下调，可一定程度地逆转心肌细胞肥大，且miR-31通过靶向调控大肿瘤抑制因子2(LATS2)的表达水平，参与心肌细胞肥大的过程。本研究发现，与对照组比，持续性房颤组患者的血清miR-31、miR-27b相对表达水平明显上调，提示血清miR-31、miR-27b可能影响持续性房颤发生。复发组患者血清miR-31、miR-27b相对表达水平显著高于未复发组，提示miR-31、miR-27b水平变化异常可能与持续性房颤射频消融术后手术效果相关。进一步相关性分析发现，持续性房颤术后复发患者的血清miR-31、miR-27b表达水平与左心房内径、hs-CRP、NT-proBNP均呈正相关，提示血清中miR-31、miR-27b可能通过调节hs-CRP、NT-proBNP进而影响持续性房颤患者术后预后情况，miR-31、miR-27b也可能影响持续性房颤患者的左心房内径。

本研究中ROC曲线分析结果显示，血清miR-31、miR-27b二者联合诊断持续性房颤射频消融术后复发的AUC为0.915，且二者联合检测特异度均高于单独检测时特异度，提示联合检测miR-31、miR-27b相对表达水平可提高对持续性房颤射频消融术后复发的诊断特异度，为临床判断提供参考。

综上所述，持续性房颤患者血清中miR-31、miR-27b水平均上调，对此类患者射频消融预后有较好的预测价值。但本研究样本较少，远期随访数据尚不足，可能研究结果存在一定偏倚。

利益冲突：无