罗杰 廖剑雄 刘维佳 余倩 刘琳

(1.贵州大学医学院，贵州 贵阳 550002；2.贵州省人民医院急诊科，贵州 贵阳 550002；3.贵州省人民医院院办，贵州 贵阳 550002；4.贵州省人民医院呼吸科，贵州 贵阳 550002)

肺动脉高压(pulmonary arterial hypertension，PAH)是以肺动脉压力和肺血管阻力进行性增高为特征的心肺血管疾病。肺动脉平滑肌细胞(pulmonary arterial smooth muscle cells，PASMCs)异常增殖导致的肺血管重构是PAH重要的病理学改变[1]。血小板源性生长因子(Platelet derived growth factor，PDGF)-BB是一种促血管生成因子，可诱导PASMCs增殖[2]。IL-6是一种多效细胞因子，在PAH患者的血清和肺组织中表达增高，并且在促血管重构方面发挥重要作用，是PAH的生存率预测因子[3-4]。JAK2为Janus激酶家族成员，是一种非受体酪氨酸激酶，参与肺血管重塑过程[5]。GATA6在PASMCs的增殖和分化中发挥调控作用，GATA6 启动子CpG 岛甲基化可导致 GATA6 失去对下游靶基因的调控，引起细胞增殖/凋亡异常[6]。然而，IL-6是否能够通过JAK2/STAT3信号通路调节GATA6 启动子甲基化，进而改变PASMCs的增殖或分化状态，目前报道较少。本研究探讨JAK2/STAT3通路抑制剂AG490、DNA甲基化抑制剂5-Aza对PDGF-BB诱导大鼠PASMCs增殖、JAK2/STAT3信号通路和GATA6基因表达变化的影响及意义。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 实验材料 实验动物为SPF级雄性SD大鼠2只，体重250～300 g，由第三军医大学动物实验中心提供。大鼠的处理符合动物伦理要求，并经贵州大学医学伦理委员会审核同意。

1.1.2 主要试剂 DMEM细胞培养基、胎牛血清购自美国GIBCO公司；青-链霉素、胰蛋白酶购自美国Hyclone公司；血小板源性生长因子(PDGF-BB)为美国Peprotech产品；AG490、5-Aza为美国MCE产品； CCK8试剂为日本Dojindo产品；JAK2、p-JAK2、STAT3、p-STAT3抗体为美国CST产品；GATA6抗体为武汉三鹰产品；反转录试剂盒为美国Thermo产品；……