衍生化-顶空固相微萃取-气相色谱法测定大鼠粪便中游离短链脂肪酸
2021-09-27张晓伟孙鑫李秀娟潘思轶
张晓伟,孙鑫,李秀娟,潘思轶
华中农业大学食品科学技术学院,武汉 430070
短链脂肪酸(short chain fatty acids,SCFAs)是肠道菌群重要代谢产物,主要包括乙酸、丙酸、异丁酸、丁酸、异戊酸、戊酸和己酸[1-2]。研究发现,约5%~10%的SCFAs被排泄在粪便中,90%以上的SCFAs在盲肠和结肠中被吸收,参与生命活动代谢,在维持肠道稳态、调节宿主代谢及免疫应答和一些相关性疾病中发挥重要作用[3-4]。粪便是目前研究SCFAs应用最为广泛的生物样品,其SCFAs浓度与结肠状态和肠道菌群密切相关,是肠道菌群监测、肠道疾病及代谢性疾病早期诊断的重要手段[5-6]。然而,SCFAs理化性质独特,含量较低且粪便等生物样品基质复杂等因素使得SCFAs的准确定量十分困难[7]。因此,建立操作简单、灵敏度高及分析成本低的检测方法对于粪便中SCFAs的分析具有重要意义。
气相色谱法 (gas chromatography,GC) 是目前分析SCFAs最为常用的方法[8-10],但是SCFAs极性较强,易在色谱柱中产生吸附(尤其在低浓度时),导致检测结果的重现性和准确度较差[9]。因此,常常会将SCFAs衍生化后再通过有机溶剂萃取,经脱水或浓缩后进行GC分析,但此过程中SCFAs 衍生物极易逸失,回收率偏低[10],而且过量衍生试剂也会对色谱柱造成损害。采用固相微萃取技术(solid-phase microextraction,SPME)可以改善上述状况,还可以大大提高方法的灵敏度,被广泛应用于食品、医药及生物领域中痕量化合物的检测[11-12]。但是衍生化SPME结合用于分析生物样品中SCFAs的报道并不多,并且还存在一些不足:回收率偏低、准确度不佳、衍生反应条件苛刻、安全性差、衍生操作繁琐、耗时及分析成本高等[13-16]。……
