李健，何鹏飞，李咏梅，吴毅歆，何鹏搏， 孔宝华，李兴玉，MUNIR Shahzad,何月秋

1.云南农业大学植物保护学院，昆明 650201； 2.云南农业大学农学与生物技术学院，昆明 650201

枯草芽孢杆菌(Bacillussubtilis)广泛存在，且较安全[1]，其发酵产品易于运输贮藏、货架期长，是目前注册并商业化生产使用最多的生防菌剂[2]，在替代或减少化学农药使用、保护环境、维护生态平衡、物种多样性和农业可持续发展中发挥着越来越重要的作用[3]，如植物病害防治[4]、植物促生长[5-6]、采后果实病害防控及保鲜[7]等方面，均有报道。枯草芽孢杆菌L1-21(下称L1-21)是一株来自温州蜜柑“新津”品种的内生菌，它对柑橘黄龙病菌有较好的抑制效果[8]，对多种常见病原细菌及真菌都有显著抑菌活性，且能定殖于多种作物体内[9]，应用潜力巨大。为了更好地在田间应用该菌株并为施用方法提供理论依据，笔者开展了枯草芽孢杆菌L1-21进入柑橘叶片、果实的速度及其防治果实绿霉病效果的研究。

1 材料与方法

1.1 试验材料及培养基

供试菌株为L1-21的绿色荧光标记菌株L1-21-GFP，来自笔者所在实验室。该菌株荧光标记稳定性好，生长速度和代谢特性及防控病害能力与野生型相同。绿霉病病原菌(Penicilliumdigitatum)为实验室自主分离并保存。柑橘植株为温州蜜柑“新津”，生长于大棚温室。柑橘果实品种为新津、砂糖橘、塘房橘、沃柑、椪柑、清香橘及冰糖橙,均购于农贸市场。

L1-21-GFP培养于LB液体和固体培养基，绿霉病菌培养于马铃薯蔗糖液体(PS)和固体培养基(PSA)。

1.2 L1-21-GFP的培养

从-80 ℃冰箱取出L1-21-GFP甘油保存菌，待其呈熔融状态后，划线接种到含氯霉素(终质量浓度为10 μg/mL，下同)的LB琼脂培养基平板中，37 ℃过夜培养。……