曹献馗 谢 斌 邵 旸 林 杰

辽宁省肿瘤医院普外科，辽宁沈阳 110042

胃癌（gastric cancer，GC）是常见的消化道肿瘤[1]，患者早期无明显症状[2]，导致诊断延迟，转移率高[3]，寻找有效的靶点对治疗GC 至关重要[4]。GC 的发生发展与基因调控网络的失衡密切相关[5]，人类基因组中存在大量的非编码蛋白质的RNA[6]。其中，长链非编码RNA（long non-coding RNAs，lncRNAs）参与转录调控和染色质修饰等生理过程，在肿瘤发生中具有重要作用[7]，与肿瘤的发展密切相关[8-9]。本研究显示lncRNA FAL1 在GC 细胞中过表达，参与肿瘤增殖和凋亡。现报道如下：

1 资料与方法

1.1 细胞培养及转染

人胃腺癌细胞株SGC-7901、BGC-823 及正常胃黏膜细胞GES-1 取自辽宁省肿瘤医院中心实验室。所有细胞系均在含10%胎牛血清（Hyclone，通用生命科学，美国）DMEM 培养基（Dulbecco’s Modified Eagle Medium，sigma，美国）中培养，另加100 U/ml 链霉素和100 U/ml 青霉素（Thermo Fisher Scientific，美国）。培养条件为37℃，5%CO2。设计并合成了2 种以FAL1为靶点的小干扰RNA（small interfering RNA，siRNA；genechem，中国），分别为si-FAL1#1 组及si-FAL1#2组。构建STAT3 过表达pcDNA3.1 质粒（Invitrogen，美国）。细胞接种于六孔板，密度1.8×105/孔，并置于37℃培养条件24 h。细胞于含10%胎牛血清、不含抗生素的DMEM 中培养基转染相应载体48 h。收集细胞进行相关实验。

1.2 RT-PCR

TRIzol 法提取样本总RNA，检测纯度及浓度。逆转录和PCR 反应均严格按照TAKARA 公司说明书进行，以U6 作为内参进行相对定量，每组设3 个复孔，ROCHE 实时定量荧光PCR 仪进行检测。FAL1 的正向引物序列：5’-CCTGGCCAAGAAGCTCATAG-3’，反向引物序列：5’-TGAGGACACCGACTACTGAGAA-3’；STAT3 的正向引物序列：5’-CAGCAGCTTGACACACGGTA-3’，反向引物序列：5’-AAACACCAAAGTGGCATGTGA-3’；U6 的正向引物序列：5’-TTATGGGTCAGGCAGAAGCAGAGGTAGCTAGCCTGAC-3’，反向引物序列：5’-CACTATTGCGGGCTGC-3’。采用2-△△Ct法计算两者的相对表达量。△Ct=Ctmarker-CtU6。PCR 条件：95℃，5 min；95℃，30 s；8℃，30 s；72℃，45 s；32 个循环，72℃，10 min。

1.3 Western blot

提取总蛋白，经10%十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis，SDS-PAGE；Beyotime，中国）。随后，转移到硝基纤维素膜（Millipore，美国）。室温下用5%脱脂牛奶封闭膜1 h，然后与STAT3（1∶1000，Proteintech，美国）和β-actin（1∶5000，Proteintech，美国）孵育过夜。……