包玉龙，董 超，刘嘉琦，周好乐

（内蒙古医科大学，内蒙古 呼和浩特 010010）

有机磷农药可防止植物产生病虫害，确保农作物高产、稳产，在农业生产中发挥着重要作用。但农药也可通过食物、环境暴露及职业接触等途径进入人体，导致急性或慢性中毒[1-3]。虽然国内外有关有机磷农药中毒机制的研究很多，但是对有机磷农药中毒发生在基因水平的改变的研究甚少。已有的有机磷农药对雄性动物生殖影响的研究主要集中在生殖毒性作用方面，这些毒性作用主要表现为精液质量下降、增加精子畸形率、降低精子活率和数量等[4-21]。

该试验利用转录组测序技术（RNA-seq）分析有机磷农药作用下雄性小鼠睾丸组织差异表达基因，为探索有机磷农药引起雄性小鼠生殖毒性的分子机制打下基础。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 有机磷农药的筛选。选择最常用的并已表现出毒性作用的有机磷农药DDV。

1.1.2 动物分组。选择40只昆明种雄性小鼠，随机分为对照组和低剂量染毒组、中剂量染毒组、高剂量染毒组。低、中、高剂量染毒组染毒剂量依次为5.0 mg/kg/d、10.0 mg/kg/d和20.0 mg/kg/d。染毒60 d后，以脱颈臼法处死小鼠，采集睾丸组织。

1.1.3 试验方法。使用天根Total RNA提取试剂盒提取各组小鼠睾丸组织Total RNA，具体操作按照试剂盒说明书进行。利用1%琼脂糖凝胶电泳进行检查；NanoPhotometerspectrophotometer检测RNA纯度(OD260/280 及 OD260/230 比值)；Qubit2.0 Fluorometer：RNA浓度精确定量；利用真核生物大部分mRNA都带有polyA尾的结构特征，通过Oligo(dT)磁珠富集带有polyA尾的mRNA进行文库构建，开展Illumina HiSeq转录组测序分析。

2 试验结果

2.1 Total RNA的提取与鉴定

对提取的总RNA进行琼脂糖凝胶电泳的结果如图1。……