郝建梅，毛明华，吕生霞，陈香妮，袁超，石磊，杨震

西安市中医医院，陕西 西安 710021

肝纤维化是肝脏的常见疾病之一，慢性肝炎发展为肝硬化的过程中常常伴随有肝纤维化［1－3］。在慢性肝脏损伤过程中，细胞外基质（extracellular matrix，ECM）分泌增加和（或）降解减少，ECM大量沉积可能会导致肝纤维化［4－5］。桃红化浊丸临证60余年，是治疗湿热伤肝病证的经验方［6－8］。前期临床研究表明，其抗肝纤维化疗效显著，已形成院内制剂，长期临床医疗实践表明，该药疗效确切，且未见明显不良反应发生，是治疗肝纤维化的有效方药。为探究其作用机制，课题组将探讨其与Smad3、金属蛋白酶组织抑制因子－1（the tissue inhibitor of metalloproteinases－1，TIMP－1）蛋白及其基因和miRNA29b的关系，从而揭示桃红化浊丸对肝纤维化的作用机理，形成清热化湿、疏肝健脾、活血通络法治疗本病的诊治规范，为以后的新药研发奠定基础。

1 材料

1.1 动物健康SPF级SD大鼠40只，雌雄各半，购自西安交通大学实验动物中心，合格证号：SCXK（陕）2019－003，伦理号：2019－1358，体质量180～220 g，饲养温度：（22±1）℃，湿度：50%～70%，换气次数：15～20次·h－1，气流速度：0.1～0.2 m·s－1，光照：150～200 Lx，12 h明暗交替，自由摄取水和食物。

1.2 药材及试剂桃红化浊丸由西安市中医医院提供；RNAiso Plus（上海善然生物科技有限公司，批号：9108）；RNA逆转录试剂盒（北京康润诚业生物科技有限公司，批号：8BC01）；StarScriptⅡcDNA第一链合成试剂盒－Ⅱ（北京康润诚业生物科技公司，货号：A214－10）；预混实时荧光定量快速PCR反应体系（北京康润诚业生物科技公司，货号：A301－05）；RIPA裂解液（西安赫特生物技术有限公司，WB053）；Smad3、TIMP－1抗体（武汉三鹰生物技术有限公司，货号分别为：66516－1－Ig、16644－1－AP；β－肌动蛋白（β－actin）单克隆抗体（美国CST公司，货号：3700）。……