张国平，李建鸿，陈小龙，赵利平，康 宁，沛 雲，叶 青，赖淑贞（通讯作者）

（1粤北人民医院肿瘤内科 广东 韶关 512026）

（2粤北人民医院放疗科 广东 韶关 512026）

我国胃癌新发病例和死亡病例在全球分别占比为42.6%和45.0%，因此对于胃癌的预防和治疗已迫在眉睫[1]。针对胃癌患者，除了常规的化疗手段，近几年还出现了热疗这一手段，并取得了一定的成效，但是胃癌细胞对于热疗敏感性降低，逐渐使之成为瓶颈。PTEN是现今发现的重要抑癌基因，可有效抑制胃癌细胞增殖，是胃癌的潜在治疗靶点，但其上游调控通路尚未明确。长链非编码RNA（LncRNA）是一类长度大于200 nt,并且没有蛋白编码功能的RNA[2]。研究发现lncRNA在肿瘤细胞的增殖、侵袭、迁移、物质代谢和血管形成等方面发挥重要作用[3]。LncRNA NBAT1是一个重要的“抑癌基因”，可以与微小RNA-21（miR-21）发生物理作用，然后抑制其表达，同时也可以调控miR-21靶向的下游基因抑制骨肉瘤细胞的增殖。因此，我们探索LncRNA-NBAT1通过miR-21能否调控PTEN增强胃癌细胞对热疗敏感性。

1.实验方法

1.1 表达miR-21的慢病毒制备

将2.2 μg PCMV-dr8.9dvpr520（上海钰博生物科技公司）、1.1 μg PCMV-dr8.9dvpr521、1.5 μg PCDH-EF1-MCS-miR21-T2A-His质粒（上海钰博生物科技公司）加入1 mLPBS中，加入10 μL DNA transfection试剂（上海生工公司），混匀后，室温静置10 min，加入293T细胞，4 h后换液，并于24、48、72 h分别收集上清，上清即为病毒液，4 ℃保存备用。

1.2 稳定表达miR-21的MGC-803细胞株建立

将上述制备的病毒液，取10 mL感染MGC-803胃癌细胞（南京模式动物研究所），控制密度约60%，于24 h和48 h后再次感染，72 h后换正常培养液培养。

1.3 Western bolt技术鉴定稳定表达miR-21的MGC-803细胞株

待培养状态稳定后收取细胞，提取蛋白，通过Western bolt技术检测His的表达以鉴定稳定表达miR-21的MGC-803细胞株是否构建成功。……