胡瑞婷 黄利强 周梦晓 周少旦 胡瑞光

(1 广西医科大学附属民族医院神经内科，广西南宁市 530001；2 广西医科大学第一附属医院神经内科，广西南宁市 530021；3 广西医科大学附属民族医院老年科，广西南宁市 530001)

颅内动脉瘤(intracranial aneurysm，IAA)是一种颅内动脉管壁上的瘤样突起，我国成年人IAA的发病率约为7%，IAA破裂可导致严重的致残率和死亡率，因而需要探讨其发病机制以采用合理的预防和治疗措施应对。研究显示遗传因素、血管壁结构、血流动力学因素和分子表达异常等均在动脉瘤的形成中发挥重要作用[1-2]。CLEC7A也称为Dectin-1，是基因编码C型凝集素/C型凝集素样结构域超家族的成员。CLEC7A在多种细胞中发挥调控作用，如CLEC7A激活的浆细胞样树突状细胞可以显著促进Th2型T细胞应答，而CLEC7A激活的髓样树突状细胞则降低Th2型T细胞应答[3]。在人的肺组织中，过表达CLEC7A可以增强肺上皮细胞对流感嗜血杆菌的促炎免疫应答[4]。在动脉瘤研究方面，有研究显示CLEC7A过表达与栓塞后动脉瘤的愈合相关[5]。这些研究均提示CLEC7A参与多种细胞的炎症损伤修复过程。然而，CLEC7A在IAA中的作用尚未清楚。本研究通过分析CLEC7A在IAA组织和血清中的表达水平，探讨CLEC7A在IAA发病中的作用。

1 资料与方法

1.1 数据集筛选 在GEO数据库检索IAA的数据集，检索词“Intracranial Aneurysm”，对检索到的数据集进行筛选，限定“人类(Homo sapiens)”“组织(tissue)”“基因芯片(Expression profiling by array)”， 样本数量>10个，最终获得2个IAA基因芯片结果，分别为GSE75436和GSE54083数据集，其中GSE75436有30个样本，包括15例IAA血管样本和15例配对的浅表动脉血管样本；GSE54083有23个样本，包括13例IAA血管样本和10例配对的浅表动脉血管样本。

1.2 研究对象 收集广西民族医院2018年1月至2019年12月收治的IAA患者的血清标本60例，收集患者的年龄、性别、动脉瘤是否破裂等临床资料。其中40例未发生IAA破裂，20例发生IAA破裂。患者年龄(45.5±7.9)岁，男28例，女32例。IAA的诊断均经影像学或血管造影证实。排除合并有肿瘤、免疫性疾病、外伤以及严重肝肾功能不全的患者。另选取正常人的血清标本20例作为对照，年龄(43.6±8.4)岁，男10例，女10例。

1.3 血清CLEC7A检测 予IAA患者入院后第二天清晨采集静脉血5 mL，室温放置2 h后，以3 000 r/min离心10 min，离心结束后吸取血清放入-80 ℃冰箱保存。采用ELISA法检测CLEC7A水平(ELISA试剂盒购自美国CUSABIO公司，检测范围31.25～2 000 pg/mL，检测灵敏度7.81 g/mL)，检测流程严格按照相应试剂盒说明书进行。

2 结 果

2.1 CLEC7A在IAA组织的表达 对CLEC7A在GSE75436和GSE54083数据集的表达水平进行分析显示，IAA组织中的CLEC7A表达量高于浅表动脉的表达量(P<0.05)，见表1。进一步分析GSE54083数据集中的CLEC7A表达水平与患者性别和年龄的关系，结果显示不同性别和年龄段IAA组织中CLEC7A表达水平的比较，差异无统计学意义(均P>0.05)。见表2。

表1 CLEC7A在IAA和正常动脉组织中表达的比较 ()

表2 GSE54083数据集中IAA组织的CLEC7A 表达水平与患者年龄和性别的关系 ()

2.2 CLEC7A在IAA患者血清中的表达 使用ELISA法检测了CLEC7A在未破裂IAA、破裂IAA患者和健康人血清中的表达水平，单因素方差分析结果显示血清CLEC7A在上述3组中表达水平差异有统计学意义(F=3.568，P=0.001)，其中在破裂IAA患者的表达水平最高(321.90±12.54)pg/mL，未破裂IAA患者次之(227.68±14.22)pg/mL，健康人最低(174.80±9.29)pg/mL；两两比较显示血清CLEC7A在未破裂IAA、破裂IAA患者的表达水平均显著高于健康人表达水平(均P<0.05)。

在不同性别方面，血清CLEC7A水平在男性和女性患者的表达差异无统计学意义[(259.51±45.94)vs.(255.86±56.88),t=0.163,P=0.875]；而在年龄方面，年龄高(≥60岁)的患者其血清CLEC7A水平比年龄低(<60岁)的患者明显升高，差异有统计学意义[(273.46±48.12)vs.(232.38±30.20),t=4.051，P=0.001]。

2.3 血清CLEC7A水平对IAA的诊断价值 以健康人血清作为对照，使用ROC曲线分析血清CLEC7A水平对IAA的诊断价值，结果显示，血清CLEC7A水平对IAA的诊断灵敏度为0.618，特异度为0.700，AUC值为0.798，最佳截断值为232.56 pg/mL。结果显示血清CLEC7A水平对IAA有一定的诊断价值。见图1。

图1 血清CLEC7A水平诊断IAA的ROC曲线

3 讨 论

随着影像学技术的发展，临床上对IAA的检出率不断提高。IAA一旦破裂将会导致蛛网膜下腔出血，其中高达35%蛛网膜下腔出血患者的预后不良。目前IAA形成的机制尚不完全清楚，但已有研究报道了数个与IAA发病密切相关的基因，如 KLF2[6]、TNF-α[7]等。近年来，一些新的与IAA发病相关的基因不断被发现，如Marchese等[8]采用基因芯片技术分析了破裂IAA血管、破裂IAA患者的颞浅动脉血管，以及未破裂IAA血管、未破裂IAA患者的颞浅动脉血管，对照颞浅动脉的基因表达情况，发现金属蛋白酶抑制剂、一氧化氮及凋亡相关信号通路与IAA破裂相关。Nakaoka等[9]利用微阵列技术检测破裂IAA血管、未破裂IAA血管和颞浅动脉血管的基因表达水平，发现早期破裂IAA中有430个基因表达升高，617个基因表达降低。这些结果表明基因的改变在IAA的发病过程中发挥重要的作用。

人的CLEC7A基因通过转录后可产生8个亚型，2个主要亚型(A、B)和6个次要亚型(C、D、E、F、G、H)。其中只有三个亚型(A、B、E)同时具有完整的CRD结构域和ITAM基序。CLEC7A的细胞内结构域而非配体结合结构域决定着物种特异性配体[10]。CLEC7A能特异性识别可溶性及颗粒性葡聚糖。CLEC7A也可识别CD4和CD8 T淋巴细胞表面的内源性配体，促进T淋巴细胞的增生。目前CLEC7A在真菌感染免疫领域的研究较多，如研究表明CLEC7A是介导固有免疫细胞识别β-葡聚糖的主要受体[11]。CLEC7A还介导了宿主细胞识别并杀死真菌感染的过程。在炎症反应方面，CLEC7A可以反应性激活mTOR-sonic-hedgehog信号级联通路，进而刺激脂质代谢酶的表达[12]。这些研究结果提示CLEC7A参与免疫和炎症性疾病发生。

本研究分析了两个基因芯片中CLEC7A的表达情况，发现IAA组织中CLEC7A表达水平显著高于正常组织的CLEC7A表达水平，表明CLEC7A参与了IAA的发病过程，并且CLEC7A高表达可能促进IAA的发病过程。既然CLEC7A在IAA组织中高表达，则其表达也有可能在血清标本中发生改变。因而本文进一步检测了CLEC7A在IAA患者血清中的表达情况，结果发现与在组织中的表达相似，CLEC7A在IAA患者血清中的表达也明显升高，且发生破裂IAA患者的CLEC7A表达水平更高，表明CLEC7A表达水平越高，IAA破裂的风险越高。此外，本研究发现了血清CLEC7A表达水平与患者年龄相关，尽管在组织中没有看到类似结果，我们考虑这与血管组织标本例数较少相关。这些结果提示年龄增大、血管变硬等因素可能导致CLEC7A表达升高，进而共同促进IAA的发生。此外，本研究分析了血清CLEC7A水平对IAA的诊断价值，结果显示血清CLEC7A水平对IAA的诊断有较高的敏感度和特异度。因此，血清CLEC7A水平可作为IAA的一个辅助诊断指标。

综上所述，CLEC7A表达水平在IAA组织和血清中均显著升高，提示CLEC7A与IAA的发病密切相关。血清CLEC7A水平可作为IAA的辅助诊断指标之一。