贺 靖, 杨 双, 刘 娟, 刘达琳, 郭婧玮, 谭云洪, 袁仕善*

(1. 湖南师范大学医学院医学检验系 小分子靶向药物研究与创制湖南省重点实验室，湖南 长沙 410013； 2. 湖南师范大学 附属第一医院检验科，湖南 长沙 410013； 3. 湖南省胸科医院 检验科，湖南 长沙 410013)

结核病(Tuberculosis，TB)是由结核分枝杆菌(Mycobacteriumtuberculosis，MTB)感染引起的一种慢性传染病。据WHO统计，2018年全球新发结核病约700万例[1]。目前结核病诊断主要基于细菌镜检和细菌培养，但细菌镜检的敏感性较低，细菌培养耗时长。MTB抗体检测是结核病诊断的有效辅助方法[2]。热休克蛋白16.3(Heat shock protein 16.3，Hsp16.3)在MTB感染早期大量分泌[3]，其免疫原性强，能诱发机体产生特异性抗体，在结核病的诊断中具有一定价值[4]。金纳米棒是在阳离子洗涤剂的胶束溶液中制备的呈棒状、各向异性金纳米颗粒[5]，其具有局部表面等离子体共振(LSRR)性质，可以利用LSRR的波长偏移检测分子对于金纳米棒的吸附，在疾病诊断中具有应用价值[6-7]。本研究建立Hsp16.3的纳米金免疫传感器检测结核病患者血清Hsp16.3抗体，为结核病诊断提供参考。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 菌株与载体 结核分枝杆菌(Mycobacteriumtuberculosis)标准株H37Rv由湖南省胸科医院检验科提供；大肠埃希菌(Escherichiacoli)JM109、原核表达载体pQE30来自小分子靶向药物研究与创制湖南省重点实验室；克隆载体pMD18-T购自大连宝生物工程公司。

1.1.2 培养基 LB培养基。

1.1.3 主要试剂与仪器 限制性核酸内切酶BamH Ⅰ、Hind Ⅲ购自大连宝生物工程公司；Ni-NTA购自美国Novogen公司；十一巯基十一烷酸(MUA)、1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺盐(EDC)、N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)购自上海晶纯试剂有限公司；……