高 琳，费 静，刘 毅，李晓红

1.西南医科大学附属医院健康管理中心（泸州646000）；2.西南医科大学附属医院耳鼻咽喉头颈外科（泸州 646000）

下咽鳞癌是一种原发于下咽部且侵袭性高的头颈部恶性肿瘤，由于其发病位置隐匿且症状不典型，大部分患者就诊时已为晚期[1]。一直以来，对下咽鳞癌早期诊断及治疗缺乏有效的治疗手段，手术、放疗和化疗是其主要治疗方式[2]，导致患者术后的整体生存情况并不理想，因此亟需新的理念及治疗药物来改善现状。

隐丹参酮（cryptotanshinone，CPT）是传统中药丹参中的主要脂溶性成分，具有抗炎、抗氧化等多种药理作用[3-4]。而近年来，CPT 被报道可抑制肝癌、胰腺癌、胃癌、结肠癌、肺癌、乳腺癌等多种肿瘤细胞增殖，阻碍肿瘤细胞侵袭与转移，表现出较好的抗肿瘤活性[5-8]。但目前并无CPT 作用于下咽鳞癌的研究报道。本研究以人下咽鳞癌细胞FaDu 为研究对象，探讨CPT对FaDu细胞增殖及迁移的影响。

1 材料

1.1 细胞

人下咽鳞癌细胞FaDu，购自中国科学院细胞库。

1.2 药物及试剂

隐丹参酮，胎牛血清（Biological Industries），高糖DMEM 培养基（Hyclone），0.25%胰蛋白酶（含EDTA，Thermo Fisher），RIPA 强裂解液（Beyotime），Transwell 小室（24 孔8.0um，Corning），CDK4、Cyclin D、GAPDH抗体（Proteintech），Vimentin抗体（Servicebio），AKT抗体（ZEN-BIO），p-AKT抗体（Beyotime）。

1.3 仪器

倒置荧光显微镜（Olymplus，日本）；全光谱分光光度计（Thermo Fisher，美国）；电泳仪、垂直电泳槽（Bio-Rad，美国）。

2 方法

2.1 细胞培养

人下咽鳞癌细胞FaDu 常规培养于含10%胎牛血清的高糖DMEM 培养基中，待细胞长至90%密度左右时，用0.25%胰蛋白酶消化传代培养，并进行后续实验。

2.2 CCK-8实验

参照CCK-8试剂盒（Beyotime）操作。

2.3 克隆形成实验

在6 孔培养板中每孔接种1 000 个FaDu 细胞，加入含CPT 的新鲜高糖DMEM 培养基处理24 h 后，换成新鲜高糖DMEM 培养基继续培养。……