赵小敏，李 多，朱明双，黄 勇，曹纪辉

(1.四川省南充市中医医院骨伤科，四川 南充 637001；2.成都中医药大学中医骨伤科学教研室/成都中医药大学附属医院骨伤科，四川 成都 610072；3.重庆市长寿区中医院骨伤科，重庆 401220)

膝关节骨性关节炎(KOA)主要以疼痛、活动受限为临床表现，其病理表现为软骨的变性破坏为主。目前学术界普遍认为KOA的发生与发展是一个慢性、长期、渐进且不可逆的病理过程。流行病学调查显示，KOA在全球的患病率为4%～13%，随着人口老龄化的进程加快，KOA患病率日渐增高[1]。传统中医药在治疗KOA中发挥着重要且不可替代的作用，其中独活寄生汤作为治疗KOA的经典名方，临床效果明显，在临床中为众多医家运用[2，3]。研究发现[4]，Zinc-ZIP8-MTF1轴的激活在膝骨关节炎软骨退变中发挥了重要作用。本课题组前期研究发现[5]，独活寄生汤可以抑制炎性状态下软骨细胞内Zn2+的浓度。本研究通过KOA模型动物，探索独活寄生汤在治疗膝骨关节炎中的作用机制，及与Zinc-ZIP8-MTF1轴在该机制中发挥的作用。

1 材料与方法

1.1 材料2018年5月至2020年12月本研究在岐黄博恩生物科技有限公司实验室完成。C57BL/6小鼠54只(均由湖南斯莱克景达实验动物有限公司提供，动物生产许可证号：SCXK(湘)2016-0002)。药品与试剂：独活寄生汤药液；水合氯醛；乙二胺四乙酸二钠盐；BCA蛋白浓度测定试剂盒；Anti-beta Actin antibody；二抗羊抗兔；Metallothionein Monoclonal Antibody；SLC30A9 Polyclonal Antibody；SLC39A8 Polyclonal Antibody；MTF1 Polyclonal Antibody；Animal Total RNA Isolation Kit；RT EasyTMⅡ；FluoZin-3 AM；Pluronic F-127；TGX Stain-Free FastCast Acrylamide Kit；SsoAdvanced Universal SYBR Green Supermix；番红-固绿染液。

1.2 动物模型制作参考文献[6，7]制作，采用7%水合氯醛行腹腔麻醉实验小鼠，选取小鼠右后膝关节作为操作模型，采用聚维酮碘和酒精对小鼠右后膝关节消毒；……