冯玮，宋鹏

（聊城大学生命科学学院，山东 聊城 252000）

羧肽酶（caboxypeptidases，CPs）是一类重要的外切蛋白酶，水解蛋白或多肽链的C端特定肽键，逐个降解释放游离氨基酸。根据催化机制不同，羧肽酶分为丝氨酸羧肽酶（EC3.4.16.-）、金属羧肽酶（EC3.4.17.-）和半胱氨酸羧肽酶（EC3.4.18.-）[1]。羧肽酶由于具有独特的水解作用，在食品工业中常用于酶法生产氨基酸[2]、制备寡肽[3]、蛋白水解物脱苦和提升风味[4]，部分特殊种类的羧肽酶还应用到生物技术领域中多肽的特异性裂解[5]和多肽氨基酸序列测定[6]。

羧肽酶在动植物、真菌及细菌中均有发现[7]，但动植物体内羧肽酶含量低、成分复杂，提取成本较高，利用微生物发酵是当今获得羧肽酶的主要方法。目前已有多种来源的羧肽酶被克隆表达，主要是微生物羧肽酶尤其是真菌来源的羧肽酶[8]。其中，已被克隆表达的黑曲霉羧肽酶有2种：羧肽酶D-I（PepF）和羧肽酶DII（PepG）[9]。

黑曲霉CBS 513.88的基因组序列于2007年完成解析并公布，但黑曲霉的蛋白数据库显示还有许多功能未确定的蛋白[10]。本文通过对黑曲霉CBS 513.88基因组全面阅读和必要的比对分析，发现了一个疑似编码丝氨酸羧肽酶的基因，并将该基因在毕赤酵母进行克隆与表达，系统解析了重组酶的酶学性质，为进一步挖掘其应用价值奠定了良好的基础。

1 材料与方法

1.1 材料与仪器

黑曲霉CGMCC 3.7193：中国普通微生物菌种保藏管理中心保藏；克隆宿主菌大肠杆菌（E.coli JM109）、表达宿主菌毕赤酵母（P.pastoris GS115）、表达质粒pPIC9K：聊城大学生物工程实验室保藏；马铃薯葡萄糖琼脂（potato dextrose agar，PDA）培养基、LB 培养基：北京奥博星生物技术有限公司；……