刘凌 沈伟敏 郭琦琪

肝癌（hepatic carcinoma）是我国最常见的恶性肿瘤之一。我国每年因原发性肝癌死亡42.2万例，约占全球50%，其不良预后与早期转移及复发有关，因此研究肝癌的侵袭转移机制至关重要[1-3]。本研究团队在前期研究中发现，肝癌组织中人硫酸酯酶-1（Hsulf-1）mRNA和蛋白表达水平较癌旁组织均明显降低，且在肝癌细胞系HepG2、SMMC7221等中Huslf-1表达较正常细胞系LO2低，提示Hsulf-1与肝癌细胞生长、侵袭转移关系密切，然而Hsulf-1在肝癌细胞侵袭转移中的具体作用机制仍不甚明确[4-5]。此外目前已有大量研究发现磷脂酰肌醇-3-激酶/蛋白激酶 B（PI3K/AKT）信号通路与肝癌的发生、发展相关[6-9]。因此本研究将进一步探讨Hsulf-1介导PI3K/AKT信号通路抑制肝癌细胞侵袭转移的作用机制。

1 材料和方法

1.1 材料 肝癌细胞系SMMC7221细胞购自上海中国科学院细胞库；pcDNA 3.1（+）-Hsulf-1、Hsulf-1 siRNA质粒均购自上海吉玛制药技术有限公司。TaKaRa RNA PCR KIT（AMV）Ver.3.0试剂盒购自深圳晶美生物工程有限公司；内参GAPDH、上皮钙黏蛋白（E-cadherin）、β-连环蛋白（β-catenin）基因引物均购自上海生工生物工程有限公司，一抗购自北京博奥森生物技术有限公司，二抗购自美国马里兰州KPL公司；Trizol试剂、DMEM、G418、FBS、细胞裂解液、LY294002、BCA 蛋白浓度测定试剂盒、ECL试剂盒、质粒DNA小量提取试剂盒、LipofectamineTM2000试剂均购自上海碧云天生物技术有限公司。

1.2 细胞培养、转染及分组 采用胰蛋白酶消化生长状态良好的SMMC7221细胞，计数后分别接种于24孔细胞培养板上，待细胞生长至70%～80%时，严格按照LipofectamineTM2000试剂盒操作说明书进行转染，分为Hsulf-1过表达组、Hsulf-1 siRNA组、抑制剂组和空白组。Hsulf-1过表达组：将 pcDNA 3.1（+）-Hsulf-1质粒转染至SMMC7221细胞中，在细胞培养箱中转染 6 h后更换培养基继续培养；……