李智慧，姚菲菲，王富霞

（郑州人民医院呼吸内科，郑州 450000）

肺癌是癌症相关死亡的主要原因，非小细胞肺癌（NSCLC）占肺癌类型的80%[1-2]。经过积极的手术切除、化学和放射治疗后，局部未转移患者的5年生存率约为55%，区域性疾病患者约为27%，远期转移患者约为4%[3]。这主要由于早期就诊率低且确诊时大多处于晚期阶段[4]。因此，寻找灵敏的肿瘤标志物和有效的治疗策略是亟待解决的问题。近年来，研究表明活化T细胞核因子（NFAT）参与肿瘤的发生、发展[5]。在前列腺癌中，活化T细胞c1核因子1（activated T cell c1 nuclear factor1，NFATc1）的表达水平增加，降低NFATc1的表达水平后，对膀胱癌细胞的增殖和转移有一定的抑制作用，可能是膀胱癌治疗的有效靶点之一[6]。在卵巢癌中，NFATc1可促进癌细胞增殖，发挥致癌作用[7]。而在NSCLC中，对NFATc1的表达水平及可能发挥的作用机制研究较少，本研究主要检测NFATc1在NSCLC细胞中的表达水平，利用转染技术敲低NFATc1的表达，进一步分析NFATc1对NSCLC细胞增殖、迁移和上皮间充质转化（EMT）的影响，为NSCLC的靶向治疗提供一定的理论依据。

1 材料与方法

1.1 材料NSCLC细胞H1650、H460、H1299及正常人支气管上皮细胞BEAS-2B（上海细胞生物学研究所）；RPMI1640培养基（北京鼎国有限公司）；总RNA提取试剂盒、反转录试剂盒（日本TaKaRa公司）；NFATc1、Vimentin、N-cadherin、E-cadherin、β-actin一抗和二抗（美国Cell Signaling Technology公司）；阴性对照质粒（si-NC）、NFATc1干扰质粒（si-NFATc1）和NFATc1 mimic质粒由北京华大基因合成。

1.2 实验方法

1.2.1 逆转录定量PCR（qRT-PCR）提取H1650、H460、H1299和BEAS-2B细胞中的总RNA，反转录为cDNA，按照SYBR Premix Ex Taq试剂盒说明进行实时定量PCR。以管家基因GAPDH的mRNA水平作为内参照。引物设计如下：NFATc1上游引物序列5′-CACCGCATCACAGGGAAGAC-3′，下游引物序列5′-GCACAGTCAATGACGGCTC-3′，GAPDH上游引物序列5′-AGAAAAACCTGCCAAATATGATGA C-3′，下游引物序列5′-TGGGTGTCGCTGTTGAAGT C-3′。……