高睿，郑祥建

（天津医科大学基础医学院药理学系，天津 300070）

生发中心激酶Ⅲ（GCKⅢ）是Sterile 20家族蛋白亚群，包括STK24、STK25、MST4。它们在控制细胞周期、细胞凋亡、细胞迁移及黏附等过程中发挥重要作用。近几年，GCKⅢ复合物被报道与很多临床疾病相关，包括海绵状脑血管畸形（CCM）[1]。CCM是较为常见的脑血管疾病，可引起卒中、头痛、癫痫、脑出血，其致病基因为CCM1、CCM2、CCM3。在结构上，CCM3通过其N-末端二聚化结构域结合GCKⅢ，并且招募其他CCM相关基因（CCM2、CCM1）形成完整的复合体，在CCM病理生理中起到不可或缺的作用[2-3]。STK24、STK25、MST4是CCM致病基因的下游，在斑马鱼模型中敲除Stk24和Stk25基因后会引起与CCM3相似的心血管表型[4-5]。本研究致力于构建血管内皮特异性Stk24和Stk25双基因敲除小鼠，为Stk24、Stk25基因敲除小鼠作为CCM疾病模型，进一步探讨CCM致病通路提供坚实基础。

1 材料及方法

1.1 实验动物Cdh5creErt2工具鼠来自Ralf Adams实验室，Stk24fl/fl小鼠由上海模式生物科技公司定制，Stk25fl/fl小鼠由本实验室构建制备。实验过程中对小鼠的处置按照中华人民共和国科学技术委员会颁布的《实验动物管理条例》相关规定进行，符合动物伦理学管理要求。伦理批号：2017022501。

小鼠的饲养繁殖均在天津医科大学实验动物中心SPF级动物房中。屏障内环境均符合国家对实验动物环境设施的要求，温度：20℃～26℃；相对湿度：40%～70%；12 h/12 h循环光照；垫料、笼器具均进行高压真空灭菌，达到纯净无菌要求，动物采用自由饮水进食的方式；鼠笼的垫料隔天更换1次，保证小鼠居住环境的洁净度。

1.2 主要试剂TRIzolTM试剂（美国Thermo Fisher Scientific公司），2X GoTaq master Mix（Promega），琼脂糖（北京索莱宝科技有限公司），DNA分子量标准指示剂（思科捷），实时定量qPCR mix（Genstar），cDNA逆转录试剂盒（genstar）血管内皮特异磁珠（Miltenyi），胶原酶Ⅳ（sigma公司）。……