毛 源, 郑江南, 封 顺*, 田瑞军*

(1.西南交通大学生命科学与工程学院, 四川 成都 610031; 2.南方科技大学理学院化学系, 广东 深圳 518055)

分泌蛋白质组(secretome)是指细胞、组织等分泌的全部蛋白质,广义的分泌蛋白组还包括从细胞膜表面脱落(ectodomain shedding)的细胞质膜蛋白[1]。许多分泌蛋白,如细胞因子、生长因子和激素等,在细胞间信号转导等过程中发挥着关键的功能。分泌蛋白的动态变化通常反映了细胞的生长情况和病理状态。分泌蛋白构成了很大一部分药物靶标,同时也是重要的生物标志物[2]。细胞的条件培养基是分泌蛋白质组研究的重要样本。目前,基于生物质谱的蛋白质组学分析可以实现对分泌蛋白的系统研究[3]。分析培养基中的分泌蛋白的主要问题在于条件培养基中的分泌蛋白浓度较低[4-7],培养基中的血清、氨基酸和添加剂等的存在可能会干扰后续的蛋白质分析。常规的分泌蛋白质组分析使用无血清细胞培养以降低样品的复杂性,一般先采用超滤、透析、冻干和三氯乙酸(TCA)或丙酮沉淀进行蛋白质的浓缩、纯化和除盐,然后进行酶解和质谱分析。这一分析流程无法实现特异性的富集分泌蛋白,从而导致分泌蛋白的鉴定数目较少。此外,长时间无血清培养细胞也容易导致其活性状态的意外改变。而基于生物正交的富集方式则可以有效避免这个问题。

近年来,含有生物正交基团(如叠氮基)的非天然糖已被用于代谢标记糖基化蛋白质[8,9],从而实现对糖蛋白的细胞成像或选择性富集并用于蛋白质组学分析。……