孙兴雅，刘 馨

锦州医科大学附属第一医院检验科，辽宁锦州 121000

口腔癌是全球最常见的恶性肿瘤之一[1]，其中90%的病理类型是鳞状细胞癌[2]，目前舌癌的治疗手段以手术根除并结合术后放、化疗为主[3]，尽管医疗水平飞速发展，但术后复发、转移以及手术影响的其他头颈部功能的丧失极大地危害着患者的生活质量。有生物活性次级代谢物的天然产物是开发新药的重要候选成分[4]，蛇床子素(osthole，OST)是从中药蛇床子中提取的一类香豆素类衍生物，除具有广泛的药理活性，包括抗氧化、抗炎、抗感染、抗过敏、治疗骨质疏松、镇痛、杀虫等作用外，还具有良好的抗肿瘤效果[5]，但对口腔癌细胞的研究报道较少，本研究主要探讨OST对人舌鳞癌Tca8113细胞凋亡、自噬的影响及分子机制。

材料和方法

材料CO2培养箱[赛默飞世尔科技(中国)有限公司]，荧光显微镜(奥林巴斯中国有限公司)，流式细胞仪(美国碧迪公司)，电泳仪和转膜仪(安玛西亚中国有限公司)；人舌鳞癌Tca8113细胞由锦州医科大学附属第一医院外科重点实验室赠予；OST购于南京景竹生物科技有限公司(分子质量：244.29，纯度>98%，CAS NO：484- 12- 8，分子式：C15H16O3)，溶于二甲基亚砜(dimethyl sulfoxide，DMSO)，且DMSO浓度<0.1%；RPMI 1640培养基、青链霉素双抗(海克隆生物化学制品北京有限公司)；胎牛血清；MTT(西格玛奥德里奇上海贸易有限公司)；结晶紫(北京索莱宝科技有限公司)；流式细胞术细胞凋亡试剂盒(上海贝博生物科技有限公司)；Hoechst 33242染液、BCA蛋白浓度测定试剂盒、聚丙烯酰胺凝胶配置试剂盒、辣根过氧化物酶标记山羊抗兔二抗IgG(H+L)(上海碧云天生物技术有限公司)，Bax 、Bcl- 2、活化的半胱氨酸蛋白酶3(美国细胞信号通路)LC3、P62、GAPDH(英国剑桥大学抗体)。

细胞培养细胞生长于RPMI 1640培养基(内含10%胎牛血清、1%青链霉素双抗)在5%CO2、37 ℃恒温培养箱中，每个培养皿5～7 ml培养液，每2～3天换1次液体，细胞长到培养皿底的80%～90%根据实验要求进行传代或者冻存，取对数生长期细胞进行实验。

细胞分组及给药方法取对数生长期Tca8113细胞分为对照组和4个剂量的实验组。对……