张泽锋，刘婉薇，张晓光

广东省人民医院(广东省医学科学院)消化内镜中心，广东 广州 510080

B细胞特异性MLV整合位点-1(B cell-specific MLV integration site-1，Bmi-1)基因于1991年由荷兰癌症中心在鼠淋巴瘤中首次发现，现已证实其广泛参与血液系统及多种实体瘤的发生、发展过程[1-3]。少数具有自我更新、分化、转移、放化疗抵抗性等特征，具有特定表面标志物的肿瘤细胞被称为肿瘤干细胞(cancer stem cells，CSCs)，认为其在肿瘤的转移中起重要作用[4]。上皮间质转化(epithelial-mesenchymal transition，EMT)指上皮细胞失去极性，经过细胞骨架重塑，转变成具有迁移能力的间充质表型过程，参与了肿瘤的转移和进展；而E-cadherin的下调或缺失和/或Vimentin的上调认为是EMT的标志性事件[5]。

前期研究中，我们通过收集35例结肠癌新鲜标本证实Bmi-1在结肠癌组织的表达明显高于癌旁组织及正常组织，且其表达水平与侵犯深度呈正相关；同时我们已初步筛选出CD133+CD44+HCT116结肠癌干细胞模型[6]，因此，本研究旨在进一步探讨Bmi-1促进结肠癌干细胞发生迁移、侵袭的作用及机制。

1 材料与方法

1.1 细胞培养人结肠癌细胞株HCT116购自中国科学院典型培养物保藏委员会细胞库(The Cell Bank of the Committee on Type Culture Collection of the Chinese Academic of Science，CCTCC，China)；HCT116细胞在37 ℃、体积分数为5% CO2条件下，于含质量浓度为100 g/L的胎牛血清(Gibco-BRL，USA)的RPMI-1640培养基(Corning，USA)中培养。成球培养基法(sphere formation media，SFM)的配置为20 ng/ml的成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor，bFGF)(PeproTech，USA)、20 ng/ml的表皮生长因子(epidermal growth factor，EGF)(PeproTech，USA)、2%的B27(按1∶50稀释，Gibco-BRL，USA)和0.4%的BSA(Invitrogen Life Technologies，USA)溶液加入RPMI-1640培养基培养。

1.2 流式细胞学细胞稀释为1×107/100 μl浓度并重悬于PBS溶液后，低温保存送往中山大学附属孙逸仙纪念医院流式细胞实验室测定CD133和CD44表达比例。

1.3 磁珠分选法(magnetic-activated cell sorting, MACS)SFM培养后HCT116细胞调整……