童海洋，张金，朱清俊，徐金勇,2*，张晓明,2*

(1. 中国科学院合肥物质科学研究院，安徽 合肥 230031；2. 安徽医科大学，安徽 合肥 230032)

组织透明技术可以显著降低组织内部光的散射和吸收，使组织样本处于近乎透明的状态[1]。然而，目前该技术还处于方法的开发和优化阶段[2]。现有的主动透明技术如丙烯酰胺交联替换脂质透明硬化成像/免疫染色/原位杂交兼容组织水凝胶(Clear Lipid-Exchanged Acrylamide-Hybridized Rigid Imaging/Immunostaining/In situ Hybridization-Compatible Tissue-Hydrogel，CLARITY)等虽然透明效果好，但免疫荧光标记速度慢，设备投入高，一般实验室难以实现，且操作较为繁琐，其广泛运用存在局限性[3]。有机溶剂型透明方法的透明效果较好，操作简单，然而大部分有机溶剂具有毒性，不利于实验人员的健康，且有机溶剂常导致荧光淬灭，组织形态结构也会发生较大变化导致图像失真，实际应用较少。亲水性的透明技术比有机溶剂型的荧光保存度高，操作便捷，对需要多种标记以及带转基因荧光的试验样本非常适合，但缺点是透明速度较慢[4]。因此，开发和优化新型透明技术已迫在眉睫。

灌注固定是脑组织透明步骤中非常重要的一个环节，脑组织能否充分灌注固定，内部的血液能否较充分的冲洗干净对后期透明至关重要。目前，经典的灌注技术还是经心脏灌注，该方法耗时较长且需要大量的灌注液，尤其针对体型较大的动物，心脏灌注法的局限性更大，灌注效果也不理想。本文介绍了经双侧颈总动脉灌注的方法，并分析其在组织透明成像技术中的优越性。……