徐红余，姚麒

骨质疏松是以骨骼强度降低、骨折风险增加为特征的一类老年人常见的骨骼疾病。骨质疏松是临床病理性骨折的常见原因，也是影响人类健康的高危因素之一[1]。成骨细胞由骨髓间充质干细胞（BMSCs）分化而来，在骨形成中具有重要作用[2]。文献报道，miR-124-3p 在老年小鼠骨组织内明显上调[3]。有研究发现在人骨髓间充质干细胞（hBMSCs）的分化过程中miR-124 表达的改变可能影响hBMscs的生物学功能[4]。但miR-124-3p对BMSCs的生物学功能尚待深入。本研究主要探讨miR-124-3p 对BMSCs 细胞增殖、成骨分化的影响，并进一步研究其调控Wnt/ -catenin 信号的作用机制。报道如下。

1 资料与方法

1.1 材料

1.1.1 细胞株 BMSCs（人源）购自上海泽叶生物科技有限公司。

1.1.2 主要试剂 TrizolTM、LipofectamineTM2000 试剂（Invitrogen 公司）；SYBR Green qPCR Mix、4×Reverse Transcription Master Mix（TaKaRa 公司）；CCK8 试剂盒（上海碧云天生物技术有限公司）；TransWell小室（上海子起生物科技有限公司）；miR-124-3p 模拟物（miR-124-3p mimics）、阴性对照（mimics-NC）（上海吉玛公司）；胎牛血清、DMEM 培养基（美国Gibco 公司）；Wnt、-catenin 和cyclin D1 单克隆抗体、HRP标记山羊抗兔IgG 二抗（美国Abcam 公司）；引物均由上海生工生物工程公司设计合成（其中miR-124-3p 引物序列：Forward：5’-GGGTATTGAG-GAAGGTGTT-3’；Reverse：5’-CAGTGCGTGTCGTGGAGT-3’；U6：Forward：5’-GCTCGCTTCGGCAGCACA-3’；Reverse：5’-AACGCTTCACGAATTTGCGT-3’）。

1.1.3 主要仪器 1658033 小型蛋白垂直电泳转印系统（武汉科昊佳生物科技有限公司），ABI 7500 荧光定量PCR 仪（美国ABI公司），美国SHELLAB 2406-2 CO2培养箱（美国SHELLAB 公司），CLARIOstar全功能多功能酶标仪（德国BMG LABTECH 公司），凝胶成像系统（美国Bio-Rad 公司）。

1.2 方法

1.2.1 细胞培养 将BMSCs 培养在含10%胎牛血清的RPMI-1640 培养基中，置于37℃、5%CO2的细胞培养箱中培养。

1.2.2 BMSCs的成骨分化 骨髓间充质干BMSCs铺板于6 孔细胞培养板生长至细胞密度为1×104个/孔，经含10%胎牛血清、50 mol/L 抗坏血酸、0.1 mol/L 二甲基亚砜（DMSO）和10 mmol/L -甘油磷酸酯的-MEM 诱导BMSCs 细胞向成骨细胞分化7 d。

1.2.3 细……